Page 30 - 《中国药房》2025年5期
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KEYWORDS     Chrysanthemum  morifolium；  water  extract；  ischemic  stroke；  muscle  atrophy；  TNF- α/JNK/MAPK  signaling
          pathway


              缺血性脑卒中作为一种严重威胁人类健康的脑血                           JNK、磷酸化 JNK（p-JNK）抗体（批号分别为 A4867、
          管疾病，具有高发病率和高致死率的特点，此外还可导                            AP1337）均购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；兔抗
          致患者运动功能障碍，进而引发骨骼肌萎缩等一系列继                            大鼠MAPK、磷酸化MAPK（p-MAPK）抗体（批号分别为
                  [1]
          发性问题 。尽管各国或地区机构的现行指南推荐了抗                            8690T、4511T）均购自美国 CST 公司；兔抗大鼠 MuRF-1
          炎、抗氧化、营养支持和神经保护等干预缺血性脑卒中                            抗体（批号 55456-1-AP）购自武汉三鹰生物技术有限公
          的措施，但仍缺乏疗效确切的药物干预手段。                                司；兔抗大鼠 Atrogin-1、黏着斑蛋白（Vinculin）抗体（批
              侯氏黑散首载于《金匮要略·中风历节病脉证并治                          号分别为 T58766S、T40106）均购自艾比玛特医药科技
                                        [2]
          五》，具有治大风、四肢烦重的功效 。菊花作为该经典                          （上海）有限公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗
          方剂的君药，在方中用量远超其他药味。本课题组前期                           （批号 BA1055）购自武汉博士德生物工程有限公司；苏
          研究发现，菊花水提物对缺血性脑卒中模型大鼠继发性                            木素-伊红（HE）染色试剂盒（批号G1120）购自北京索莱
                                      [3]
          的骨骼肌萎缩具有显著改善作用 ，然而，其具体作用机                           宝科技有限公司。
          制尚未得到深入阐释。                                          1.3 实验动物
              研究表明，缺血性脑卒中后骨骼肌萎缩的发生与肿                              雄性 SD 大鼠（SPF 级，6～8 周龄，体重 220～250 g）
          瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）/c-Jun 氨      购自北京斯贝福实验动物科技有限公司，动物生产许可
          基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）/丝裂原活化            证号为 SCXK（北京）2019-0010。所有动物在实验开始
          蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号       前，适应性饲养 7 d。饲养环境保持恒定温度（22～
          通路的激活密切相关，TNF-α作为炎症过程中的关键细                          25 ℃）和湿度（40%～60%），并实施 12 h 光照与 12 h 黑
          胞因子，参与了炎症反应的发生与扩散；缺血性脑卒中                            暗交替饲养。本实验中的动物护理与使用严格遵循成
                                                        [4]
          发生后，TNF-α与骨骼肌细胞膜上的TNF-α受体结合 ，                       都中医药大学实验动物伦理委员会制定的《动物护理与
          从而激活JNK/MAPK信号通路，进而促进肌肉环指蛋白                         使用指南》，并已获得该委员会的伦理批准，批准编号为
          1（muscle ring-finger protein-1，MuRF-1）和肌萎缩蛋白        2024054。
                                                     [5]
          Fbox-1（Atrogin-1）等骨骼肌萎缩相关分子的表达 ，最                   2 方法
          终导致肌肉损伤。基于此，本研究拟基于 TNF-α/JNK/                       2.1 菊花水提物的制备
          MAPK 信号通路进一步研究菊花水提物对大鼠缺血性                               将250 g菊花用高速粉碎机粉碎，过10目筛，弃去残
          脑卒中后骨骼肌萎缩的改善作用及机制，以期为菊花在                            渣。参考本课题组前期研究方法提取：按照1∶500（g/mL）
          临床用于缺血性脑卒中提供参考。                                     的料液比加入纯水，超声处理30 min，然后在60 ℃恒温
          1 材料                                                下冷凝回流提取 3 次；合并所有提取液，在 60 ℃恒温下
          1.1 主要仪器                                            减压浓缩至250 mL，经冷冻干燥后得到菊花冻干粉25 g
                                       ®
              本研究所用主要仪器有Cubis Ⅱ型电子天平（德国                      （得率为10%，采用高效液相色谱法检测其中绿原酸、木
          Sartorius 公司）、Varioskan Flash 型全波长多功能酶标仪            犀草素、异绿原酸含量分别为 2.5、1.0、1.5 mg/g）。临用
         （美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、RM6240XC 型多         时用蒸馏水溶解，备用。
          道生理信号采集处理系统（成都仪器厂）、RFSLI ZW/                        2.2 动物分组、造模与给药
          RFLS Ⅲ型激光散斑系统（深圳市瑞沃德生命科技股份                              将45只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型
          有限公司）、Pannoramic SCAN Ⅱ型病理切片扫描仪（山                   组、ATP组（阳性对照，10 mg/kg，剂量根据临床等效剂量
          东斯瑞缔医疗科技有限公司）、ChemiDoc型免染型化学                        换算）、菊花水提物高剂量组（1.08 g/kg，以生药量计，剂
          发光凝胶成像系统（美国Bio-Rad公司）。                              量参考文献[6―7]设置）和菊花水提物低剂量组（0.54
          1.2 主要药品与试剂                                         g/kg，以生药量计，剂量参考文献[6―7]设置），每组9只。
              菊花购自中国北京同仁堂（集团）有限责任公司，经                         采用大脑中动脉栓塞法复制缺血性脑卒中模型，造模过
                                                                    [8]
          成都中医药大学中药资源与鉴定系周涛副教授鉴定为                             程如下 ：对大鼠注射 Zoletil 50（1 mL/kg）进行麻醉，然
          菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头            后将其仰卧固定于手术板上，在其颈部正中线，从喉结
          状花序。Zoletil 50（批号BN8LXLA）购自法国Virbac公                至胸骨处切开 2.5～4 cm 的皮肤切口；通过其左侧颈总
          司；三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）购自广州             动脉小心插入带有圆形尖端的尼龙线（直径 0.26 mm），
          白云山医药集团股份有限公司；TNF-α 试剂盒（批号                          沿颈内动脉推进约 18～20 mm，以阻塞大脑中动脉，诱
          MM-0180R1）购自江苏酶免实业有限公司；胶原酶Ⅱ、兔                       导局灶性脑缺血；缝合创口后，在缝合处涂抹碘伏消毒，
          抗大鼠TNF-α抗体（批号分别为40508ES76、AF8208）均                  并注射庆大霉素和青霉素以防止感染。Sham组大鼠仅
          购自上海碧云天生物技术股份有限公司；兔抗大鼠                              暴露血管但不插入尼龙线。术后第1天，各组大鼠灌胃


          · 536 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5                               中国药房  2025年第36卷第5期
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