Page 24 - 《中国药房》2025年5期
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experiments  showed  that  compared  with  DOX  group，  there  was  a  trend  of  up-regulation  of  COP1  mRNA，  and  significant  down-
          regulation of CCNE1， GADD45A， and GADD45B mRNA expression in IMP+DOX group （P＜0.05）. CONCLUSIONS The effect
          of  IMP  in  ameliorating  DOX  resistance  in  breast  cancer  is  related  to  its  regulation  of  COP1，  CCNE1，  GADD45A  and  GADD45B
          targets in the p53 signaling pathway.
          KEYWORDS     imperatorin； breast cancer； doxorubicin resistance； transcriptomics； p53 signaling pathway



              乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，已成为全球女性                          1.2 主要药品与试剂
          癌症死亡的主要原因 。目前，对乳腺癌的治疗方法主                                IMP 对照品（批号 PS000723，纯度＞98.0%）购自成
                             [1]
          要有手术治疗、放疗、化疗等。多柔比星（doxorubicin，                     都普思生物科技股份有限公司；盐酸DOX原料药（批号
          DOX）是一种蒽环类抗生素，对乳腺癌以及多种恶性肿                           827G033，纯度≥99%）购自北京索莱宝科技有限公司；
          瘤有效，是临床应用广泛的抗癌化疗药。然而，部分患                            MTT 试剂（批号 EZ7890B104）购自德国 BioFroxx 公司；
          者在经 DOX 治疗后会出现耐药性，使其应用受到限                           总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂
                                                              盒（批号分别为AM91949A、AM62046A、AMF1769A）均
            [2]
          制 。因此，寻找化疗增敏剂、改善乳腺癌耐药是亟待解
                                                              购自日本Takara公司；兔源多药耐药相关蛋白1（multidrug
          决的关键问题。
                                                              resistance-associated protein 1，MRP1）单克隆抗体（批号
              欧前胡素（imperatorin，IMP）是一种天然的呋喃香
                                                              Ab260038）购自英国 Abcam 公司；鼠源多药耐药蛋白 1
          豆素，存在于白芷、大戟和当归根等多种中药中，具有抗
                                                             （multidrug resistance protein 1，MDR1）单克隆抗体、β-肌
                                                     [3]
          肿瘤、抗炎、抗氧化和保护心血管等多种药理作用 。近
                                                              动蛋白（β-actin）单克隆抗体（批号分别为 sc-55510、sc-
          年来，IMP 作为潜在的抗癌药物引起了人们的关注。
                                                              47778）均购自美国 Santa Cruz 公司；辣根过氧化物酶
          IMP 可抑制肝癌、结肠癌、肺癌等多种不同肿瘤细胞的
                                                             （HRP）标记的山羊抗兔二抗及山羊抗小鼠二抗（批号分
          生长，其作用机制主要包括抑制肿瘤细胞增殖、侵袭、迁
                                                              别为H681481011、H681006001）均购自杭州华安生物技
                                                     [3]
          移，诱导肿瘤细胞凋亡、自噬和阻滞肿瘤细胞周期 。有                           术有限公司；MEM 培养基（批号 MA0217-Nov-08H）购
                                                   [4]
          研究发现，IMP 可拮抗药物外排蛋白的功能 ，增强                           自 大 连 美 仑 生 物 技 术 有 限 公 司 ；胎 牛 血 清（批 号
          DOX、紫杉醇、吉西他滨等化疗药物对肿瘤耐药细胞的                           A121028）购自美国 Gemini 公司；RIPA 裂解缓冲液、
          细胞毒作用      [5―6] ，靶向髓样细胞白血病蛋白 1（myeloid             BCA 蛋白浓度测定试剂盒、ECL 发光试剂盒及显影定
          cell leukemia-1，MCL-1）逆转肝癌细胞对顺铂的耐药                  影试剂盒（批号分别为 112023240207、070721211202、
            [7]
          性 ，靶向 MCL-1 促进非特异性免疫 T 淋巴细胞诱导                       022823230802、042420201023）均购自上海碧云天生物
                +
                             [8]
          CD 133 肺癌细胞凋亡 。上述研究提示，IMP具有抑制                       技术有限公司。
          多种肿瘤细胞耐药的作用，然而关于其对乳腺癌 DOX                           1.3 细胞
          耐药是否有逆转作用尚不明确。因此，本研究以人乳腺                                人乳腺癌耐 DOX 细胞株 MCF-7/DOX 购自中国科
          癌DOX耐药株MCF-7/DOX为研究对象，考察IMP对乳                       学院细胞库。
          腺癌 DOX 耐药的影响，通过转录组学筛选 IMP 对乳腺                       2 方法与结果
                                                              2.1 细胞培养
          癌DOX耐药的关键靶点，分析IMP改善乳腺癌DOX耐
                                                                  参考文献[9]方法培养MCF-7/DOX细胞。
          药的生物学途径及相关信号通路，并对关键靶点进行验
                                                              2.2 IMP对MCF-7/DOX细胞活力的影响
          证，旨在为阐明 IMP 缓解乳腺癌 DOX 耐药的作用及可
                                                                  参考文献[9]方法，采用 MTT 法考察 12.5、25、50、
          能机制提供参考。
                                                              100、200 μg/mL 的 IMP 对 MCF-7/DOX 细胞活力的影
          1 材料
                                                              响，每个质量浓度设置 6 个复孔；以含 1‰ 二甲基亚砜
          1.1 主要仪器
                                                             （DMSO）的培养基为空白对照。药物作用48 h后，采用
              本研究所用的主要仪器包括SpectraMax Plus384型
                                                              酶标仪于 492 nm 波长处检测各孔光密度（optical den‐
                                                        TM
          全波长酶标仪（美国 Molecular Devices 公司），T100                sity，OD）值并计算细胞存活率。细胞存活率（%）＝药物
          Thermal  Cycler 型 PCR 仪 、CFX96 型 Real-Time  PCR     孔 OD 值/空白对照孔 OD 值×100%。采用 GraphPad
                                        TM
          仪、Mini-PROTEAN Tetra Cell 型电泳系统（美国 Bio-             Prism 8.0软件对数据进行统计分析；符合正态分布的定
                           ®
          Rad公司），MI52-N型倒置生物显微镜（广州市明美光电                       量资料以x±s表示，采用单因素方差分析进行多组间比
          技术有限公司），WJ-Ⅲ型二氧化碳细胞培养箱（上海新                          较，进一步组间两两比较采用Tukey检验；检验水准α＝
          苗医疗器械制造有限公司）等。                                      0.05。结果见图1。


          · 530 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5                               中国药房  2025年第36卷第5期
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