Page 58 - 《中国药房》2025年4期
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有限公司进行，实验方案经该公司实验动物伦理委员会                            体中ATP含量和钠钾ATP酶、钙镁ATP酶活性。
          审批，审批号为2024-03-232。                                 2.7 大鼠肾组织中相关蛋白表达检测
          2 方法                                                    取“2.6”项下各组大鼠的肾组织适量，提取总蛋白并
          2.1 分组、造模与给药                                        定量检测，随后于热水浴中变性。取变性蛋白适量，经
              取 50 只大鼠，采用 5/6 肾切除术建立 CRF 模型：将                 电泳分离、转膜后封闭 2 h；洗膜后，加入 TGF-β、HIF-
          大鼠麻醉后以俯卧位固定，背部剃毛后消毒，于肋脊角                            1α、α-SMA、cleaved-caspase-3、Jagged-1、Notch-1、β-actin
          左下约1 cm处切一小口，暴露左肾，结扎肾蒂，分别切除                         一抗（稀释比例均为1∶1 500），于4 ℃下孵育过夜；洗膜
          左肾上、下1/3，止血后复位，缝合并消毒；7 d后，同法完                       后，加入相应二抗（稀释比例均为1∶5 000），于室温下孵
          全摘除右肾。若大鼠 BUN、SCr 水平较对照组（CK 组）                      育2 h；洗膜后，以ECL显色，置于凝胶成像系统下成像。
                                                [8]
          大鼠高 1 倍以上，则表明 CRF 模型构建成功 。另取 10                     以 β-actin 为内参，使用 Image-Pro Plus 软件对各目的蛋
          只大鼠，打开腹腔，暴露肾脏，剔除肾筋膜但不进行切除                           白的条带灰度值进行分析，以目的蛋白与内参蛋白
          操作，作为 CK 组。本研究共有 42 只大鼠造模成功，随                      （β-actin）的灰度值比值作为目的蛋白的表达水平。
          机选取其中 40 只，分为模型组（Model 组）、AST 低剂量                   2.8 统计学方法
          组（AST-L组）、AST高剂量组（AST-H组）、AST高剂量+                       采用 GraphPad Prism 8.0.1 软件对数据进行统计分
          Notch-1 通路激活剂组（AST-H+JFC 组），每组 10 只。                析。实验数据以x±s表示，多组间比较采用单因素方差
          AST-L组和AST-H组大鼠分别灌胃40、80 mg/kg的AST                  分析，进一步两两比较采用 SNK-q 检验。检验水准
                               [9]
         （以二甲基亚砜为溶剂） ，AST-H+JFC 组大鼠同时灌胃                       α＝0.05。
          80 mg/kg 的 AST（以二甲基亚砜为溶剂） 和 0.5 mg/kg               3 结果
                                              [9]
                            [10]
          的JFC（以水为溶剂） ，CK组和Model组大鼠灌胃等体                       3.1 AST对大鼠血清BUN、SCr和尿液UP水平的影响
          积生理盐水，每天1次，连续4周。                                        与 CK 组比较，Model 组大鼠血清 BUN、SCr 水平和
          2.2 大鼠血清BUN、SCr及尿液UP水平检测                            尿液 UP 水平均显著升高（P＜0.05）；与 Model 组比较，
              末次给药后，各组大鼠禁食、不禁水12 h，收集其24                      AST-L、AST-H 组大鼠血清 BUN、SCr 水平和尿液 UP 水
          h尿液，并于腹主动脉取血3 mL（血样离心10 min，收集                      平均显著降低，且 AST-H 组显著低于 AST-L 组（P＜
          上层血清），使用全自动生化分析仪检测其血清 BUN、                          0.05）；与AST-H比较，AST-H+JFC组大鼠血清BUN、SCr
          SCr水平和24 h尿液UP水平。                                   水 平 和 尿 液 UP 水 平 均 显 著 升 高（P＜0.05）。 结 果
          2.3 大鼠血清LDH、TNF-α、IL-6、IL-10水平检测                    见表1。
              取“2.2”项下各组大鼠血清适量，按相应 ELISA 试                    表1 AST 对大鼠血清 BUN、SCr 和尿液 UP 水平的影
          剂盒说明书操作，使用酶标仪检测其血清LDH、TNF-α、                             响（x±s，n＝10）
          IL-6、IL-10水平。                                       组别         血清BUN/（mmol/L）  血清SCr/（μmol/L）  尿液UP/mg
          2.4 大鼠肾组织形态观察                                       CK组          6.24±0.98     48.27±6.32  6.28±1.14
              取血后，以颈椎脱臼法将各组大鼠处死，剖取肾脏。                         Model组       19.53±2.41 a  256.83±31.76 a  34.57±4.38 a
                                                              AST-L组       15.36±1.72 b  192.76±24.91 b  26.84±3.12 b
          随机选择每组 5 只大鼠的左肾组织，以 4% 多聚甲醛溶
                                                              AST-H组       10.68±1.54 bc  137.42±16.58 bc  15.96±2.23 bc
          液固定后脱水，以石蜡包埋并切片，根据HE染色试剂盒                           AST-H+JFC组   16.87±2.13 d  213.65±27.47 d  29.43±3.76 d
          说明书方法操作，依次进行苏木精、伊红染色后，使用显                              a：与CK组比较，P＜0.05；b：与Model组比较，P＜0.05；c：与AST-L
          微镜观察其肾组织形态。                                         组比较，P＜0.05；d：与AST-H组比较，P＜0.05。
          2.5 大鼠肾组织纤维化观察                                      3.2 AST对大鼠血清LDH、TNF-α、IL-6、IL-10水平的
              取“2.4”项下各组大鼠肾组织切片，脱蜡、清洗后，以                      影响
          苏木精染色 10 min；清洗，以磷钼酸浸染 3 min 后，用苯                       与CK组比较，Model组大鼠血清LDH、TNF-α、IL-6
          胺蓝染液染色 5 min；以 1% 冰醋酸浸泡后，用无水乙醇                      水平均显著升高，IL-10 水平显著降低（P＜0.05）；与
          脱水，用二甲苯透明，封片，使用显微镜观察其肾组织纤                           Model组比较，AST-L、AST-H组大鼠血清LDH、TNF-α、
          维化情况。                                               IL-6 水平均显著降低，IL-10 水平均显著升高，且 AST-H
          2.6 大鼠肾组织线粒体中 ATP 含量和钠钾 ATP 酶、钙                     组上述指标的变化较 AST-L 组明显（P＜0.05）；与 AST-
          镁ATP酶活性检测                                           H 组比较，AST-H+JFC 组大鼠血清 LDH、TNF-α、IL-6 水
              取各组剩余 5 只大鼠的肾组织适量，加入裂解液研                        平均显著升高，IL-10 水平显著降低（P＜0.05）。结果
          磨匀浆，于4 ℃下离心5 min×2次；取上清液，再于4 ℃                      见表2。
          下离心 10 min，取沉淀（即线粒体），以缓冲液 0.3 mL 重                  3.3 AST对大鼠肾组织形态的影响
          悬，并于 4 ℃下离心 5 min；取上清液，按相应试剂盒说                          CK 组大鼠肾小管和肾小球形态较为完整，没有明
          明书方法操作，采用微量法以酶标仪检测其肾组织线粒                            显病变；Model 组大鼠肾小球基底膜明显增生、系膜扩


          · 436 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 4                               中国药房  2025年第36卷第4期
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