Page 86 - 《中国药房》2025年3期
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上述 3 种成分精密度试验的 RSD 分别为 0.81%、0.62%、                 数进行系统考察。将龙眼核标准汤剂浓缩至500 mL，分
          0.68%（n＝6）；重复性试验的RSD分别为1.36%、1.01%、                 别按“2.1”～“2.4”项下方法测定出膏率、指标成分含量、
          0.90%（n＝6）；稳定性试验的RSD分别为1.44%、1.67%、                 DPPH 自由基 IC50 和 ABTS 自由基 IC50。结果（表 1）显
          1.73%（n＝6）；平均加样回收率分别为 97.04%、94.73%、                示，在加水量为10～14倍时，出膏率变化不大，没食子酸
          101.04%，RSD分别为2.21%、2.24%、2.09%（n＝6）。               含量、柯里拉京含量、鞣花酸含量增加较为明显，DPPH、
          2.3 DPPH自由基清除实验                                     ABTS 自由基 IC50较低，故选择加水量为 10～14 倍进行
          2.3.1 溶液的配制                                         正交实验。在提取时间为50 min时出膏率最高，没食子
              精密称取龙眼核标准汤剂冻干粉适量，加甲醇制成                          酸含量在提取90 min时最高，提取时间为30 min时柯里
          质量浓度为 0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1 mg/mL 的供试品溶            拉京含量、鞣花酸含量最高并且 DPPH、ABTS 自由基
          液。取 DPPH 适量，加甲醇制成质量浓度为 0.3 mg/mL                    IC50最低，结合时间成本，选择提取时间为15～50 min进
          的DPPH甲醇溶液。上述溶液均避光保存，备用。                             行正交实验。出膏率随提取次数的增加而升高，没食子
          2.3.2 DPPH自由基清除率的测定                                 酸含量在提取4次时最高；柯里拉京含量、鞣花酸含量均
              参考文献[9]方法，取“2.3.1”项下不同质量浓度的供                    在提取 5 次时最高，但与提取 2～4 次含量相差不大；
          试品溶液与DPPH甲醇溶液各100 μL于同一孔中，作为                        ABTS 自由基 IC50 变化趋势亦如此，但在提取 2 次时
          实验组。以甲醇溶液代替DPPH甲醇溶液，其余操作同                           DPPH 自由基 IC50最低。综合时间、耗能等因素选择提
          实验组，作为对照组；以甲醇溶液代替供试品溶液，其余                           取2～4次进行正交实验。
          操作同实验组，作为标准组。将各组样品置于暗处反应                                     表1 单因素实验水平设计及结果
          30 min，使用酶标仪于 517 nm 波长处测定各组吸光度                                出膏率/ 没食子酸含 柯里拉京含 鞣花酸含  DPPH自由基 ABTS自由基
                                                              因素     水平
         （A），按下式计算 DPPH 自由基清除率：DPPH 自由基清                                  %   量/（mg/g）  量/（mg/g） 量/（mg/g） IC 50/（mg/mL） IC 50/（mg/mL）
                                                              加水量/倍   6  18.55  4.78  4.90  7.73  0.299 3  0.268 3
          除率＝1－（A2－A1 ）/A0 （式中，A2为实验组A，A1为对照组                         8  20.78  5.37  5.90  10.12  0.269 7  0.234 2
          A，A0为标准组 A）。运用 GraphPad Prism 8.3.0 软件计算                    10  20.89  5.68  6.04  10.70  0.265 2  0.203 2
          样品对 DPPH 自由基的半数清除浓度（half clearance                          12  20.31  6.67  6.51  11.99  0.247 1  0.202 2
                                                                      14  20.80  6.68  6.84  12.33  0.243 5  0.208 4
          concentration，IC50 ），记为DPPH自由基IC50。                 提取时间/min 15  18.61  5.99  5.83  11.30  0.238 9  0.369 5
          2.4 ABTS自由基清除实验                                             30  20.67  6.62  7.14  12.55  0.194 7  0.228 3
                                                                      50  22.70  6.66  6.98  11.50  0.286 8  0.234 2
          2.4.1 溶液的配制
                                                                      70  20.24  6.43  6.31  9.68  0.289 2  0.264 4
              精密称取龙眼核标准汤剂冻干粉适量，加甲醇制成                                  90  19.51  7.30  6.44  9.69  0.281 1  0.253 9
          质量浓度为 0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1 mg/mL 的供试品溶            提取次数/次  1  17.71  5.17  5.34  9.41  0.240 2  0.240 6
                                                                      2  19.19  6.48  6.97  12.52  0.211 6  0.219 6
          液。将 3.84 mg/mL 的 ABTS 溶液与 1.34 mg/mL 的过硫
                                                                      3  22.34  6.84  7.27  13.88  0.236 8  0.180 9
          酸钾溶液按体积比1∶1混合，于室温、暗处静置16 h后得                                4  23.92  6.98  7.04  13.86  0.243 2  0.176 3
          ABTS 自由基储备液。使用前，以磷酸盐缓冲液（PBS，                                5  24.74  6.78  7.48  14.64  0.260 1  0.170 6
          pH7.4）稀释约20倍，得ABTS自由基工作液。                           2.6 AHP-CRITIC法结合正交实验优选提取工艺
          2.4.2 ABTS自由基清除率的测定                                 2.6.1 AHP法计算权重
              参考文献[10]方法并适当修改后进行测定。取                              多项研究结果表明，龙眼核具有良好的抗氧化活
         “2.4.1”项下不同质量浓度的供试品溶液20 μL和ABTS                      性 [11―12] ，为确保龙眼核标准汤剂的抗氧化效果，故将龙
          自由基工作液 180 μL 于同一 96 孔板中，作为实验组。                     眼核标准汤剂对 DPPH、ABTS 自由基的清除能力作为
          以 PBS 代替 ABTS 工作液，其余操作同实验组，作为对                      第一重要指标。多酚类成分为龙眼核抗氧化作用主要
                                                                      [3]
          照组。以 PBS 代替供试品溶液，其余操作同实验组，作                         化学成分 ，故将龙眼核标准汤剂中3种多酚类成分（没
          为标准组。将各组样品置于暗处反应30 min，使用酶标                         食子酸、柯里拉京、鞣花酸）含量作为第二重要指标。出
          仪于 734 nm 波长处测定各组吸光度（A），按下式计算                       膏率虽然是判断提取工艺稳定性的重要指标，但未直接
          ABTS 自由基清除率：ABTS 自由基清除率＝1－（A2－                      反映龙眼核标准汤剂抗氧化效果和化学信息 ，故将其
                                                                                                    [13]
          A1 ）/A0 （式中，A2为实验组 A，A1为对照组 A，A0为标准组                作为第三重要指标。按 DPPH 自由基 IC50＝ABTS 自由
          A）。运用 GraphPad Prism 8.3.0 软件计算样品对 ABTS             基IC50＞没食子酸含量＝柯里拉京含量＝鞣花酸含量＞
          自由基的IC50，记为ABTS自由基IC50。                             出膏率的顺序，采用 SPSS PRO 在线系统（https：//www.
          2.5 单因素实验筛选提取工艺条件                                   spsspro.com/）对评价指标进行两两比较，构建判断矩阵
              称取龙眼核药材，每份 100 g，捣碎表皮及种仁，浸                      并进行一致性评价。一致性检验结果显示，最大特征根
          泡 30 min，按表 1 水平分别对加水量、提取时间、提取次                     为6，一致性指标为0，平均随机一致性指标为1.25，一致


          · 332 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 3                               中国药房  2025年第36卷第3期
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