Page 64 - 《中国药房》2025年2期

medicated serum for 72 h after 48 h intervention with 50 μmol/L DHEA）， Siwutang+si-NC group [negative control small
interfering RNA （siRNA） transfected cells treated with 50 μmol/L DHEA for 48 h， and then with 10% medium-concentration of
Siwutang medicated serum for 72 h] and Siwutang+si-FBP1 group （FBP1 siRNA transfected cells treated with 50 μmol/L DHEA
for 48 h， and then with 10% medium-concentration Siwutang medicated serum for 72 h）. The effects of knocking down FBP1 on
the above-mentioned effects of Siwutang were detected. RESULTS Compared with control group， DHEA group exhibited an
increase in the number of autophagosomes， an elevated LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ and p-mTOR/mTOR， as well as increases in protein and
mRNA expressions of FBP1， and decreased protein expression of p62 （P＜0.05）. Compared to both DHEA group and blank serum
group， the medium-concentration of Siwutang medicated serum group showed a decrease in the number of autophagosomes， a
decrease in LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ， and increases in p-mTOR/mTOR， protein expression of p62， protein and mRNA expressions of FBP1
（P＜0.05）. After knocking down FBP1， compared with Siwutang+si-NC group， Siwutang+si-FBP1 group showed a significant
decrease in cell viability， protein expression of p62 ， protein and mRNA expressions of FBP1 as well as p-mTOR/mTOR， and an
increase in LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ （P＜0.05）. CONCLUSIONS Siwutang can promote the phosphorylation of mTOR protein by up-
regulating the protein and mRNA expressions of FBP1 in KGN cells， thus inhibiting autophagy of KGN cells.
KEYWORDS Siwutang； medicated serum； polycystic ovarian syndrome； ovarian granulosa cells； FBP1/mTOR signaling pathway

多 囊 卵 巢 综 合 征（polycystic ovarian syndrome， 路出发，初步探讨四物汤含药血清对卵巢颗粒细胞自噬
PCOS）是育龄期女性最常见的生殖内分泌疾病之一，是 的影响，以期为阐明该方治疗PCOS的机制提供参考。
导致女性无排卵性不孕的最常见原因，以高胰岛素血 1 材料
症、高雄激素血症、卵巢多囊样改变、月经不调等为主要 1.1 主要仪器
[1]
症状 。PCOS是高血压、2型糖尿病、妊娠期糖尿病、心 本研究所用主要仪器包括 JY300HC 型通用型电泳
[2]
血管疾病及子宫内膜癌等疾病的重要危险因素 。研究 仪（北京君意华鑫科技有限公司）、MK3型酶标仪和LS-
指出，卵泡发育异常是PCOS的主要特征，而卵泡内卵巢 C0150 型 CO2细胞培养箱（美国 Thermo Fisher Scientific
颗粒细胞的增殖、分化及自噬在卵泡生长发育过程中发 公司）、FluorChem FC3 型化学发光凝胶成像系统（美国
[3]
挥着十分重要的作用 。其中，卵巢颗粒细胞在卵泡发 ProteinSimple 公司）、MyGo Pro 型实时荧光定量聚合酶
育不同阶段出现的过度自噬均会导致卵母细胞质量下 链式反应（PCR）仪（英国IT-IS公司）、Axio Observer 3型
倒置荧光显微镜（德国Zeiss公司）等。
降，从而导致排卵障碍和性激素合成失调，最终诱发
1.2 主要药品与试剂
[4]
PCOS 。
熟地黄、当归、白芍、川芎配方颗粒[批号分别为
四物汤始载于《仙授理伤续断秘方》，以熟地黄、当
2105012W、2201005C、2104012W、2109027C，规格分别
归、川芎、白芍4味药材熬制而成，是中医补血、养血的经
为每袋装3 g（相当于饮片10 g）、2 g（相当于饮片3 g）、1
典方。四物汤作为“妇科第一方”，可刺激卵泡发育、减
g（相当于饮片10 g）、1 g（相当于饮片3 g）]，均购自河南
[5]
少卵泡闭锁，在治疗PCOS方面独具优势 ，但其作用机
省中医院/河南中医药大学第二附属医院；胎牛血清和
制尚不明确。本课题组前期网络药理学初筛发现，
DMEM/F12 培 养 基（ 批 号 分 别 为 SH30070.01、
FBP1是四物汤的潜在靶基因；同时，全基因组关联分析
SH30023.02）均购自美国Hyclone公司；脱氢表雄酮（de‐
[6]
[7]
发现，FBP1 是 PCOS 易感基因之一 。Liu 等 研究表
hydroepiandrosterone，DHEA；批 号 252805）购 自 美 国
明，果糖-1，6-二磷酸酶1（fructose-1，6-bisphosphatase 1，
Sigma 公 司 ；兔 微 管 相 关 蛋 白 1 轻 链 3（microtubule-
FBP1）在以高雄激素培养的小鼠卵巢颗粒细胞中表达异
associated protein 1 light chain 3，LC3）、p62、FBP1、
常，提示 FBP1 蛋白可能参与了 PCOS 的发生发展过程。 mTOR、磷 酸 化 mTOR （phosphorylated mTOR，p-
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamy‐ mTOR）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体和
cin，mTOR）是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批
参与自噬负向调控的主要因子 。mTOR可通过影响细 号 分 别 为 ab63817、ab109012、ab109732、ab134903、
[8]
胞自噬、氧化应激、炎症反应、线粒体功能、葡萄糖摄取 ab109268、ab8245、ab6721）均 购 自 英 国 Abcam 公 司 ；
等途径来影响卵泡的发育和成熟，进而调控 PCOS 进 RIPA 细胞裂解液和 BCA 蛋白定量试剂盒（批号分别为
[9]
程 。研究发现，FBP1可通过调控mTOR而抑制前列腺 P0013J、P0010）均购自上海碧云天生物技术股份有限公
[10]
癌细胞自噬 。基于此，本研究从 FBP1/mTOR 信号通 司；绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）-LC3

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