Page 59 - 《中国药房》2025年2期

2.4 方法学考察 dard deviation，RSD）和相对误差（relative error，RE）表
2.4.1 专属性试验 示。结果（表 1）显示，环泊酚的批内及批间精密度试验
取大鼠空白血浆（不加内标）、250 ng/mL 的环泊酚 的 RSD 均小于 8%，RE 均不超过±6%，符合 2020 年版
[13]
模拟血浆样品（配制方法见“2.4.2”项）、给予环泊酚 12 《中国药典》（四部）的相关要求 。
min 后的大鼠血浆样品，分别按“2.3”项下方法处理后， 表1 大鼠血浆样品中环泊酚质量浓度检测的精密度与
按“2.1”项下条件进样分析，考察方法的专属性。色谱图 准确度试验结果
如图1所示，血浆中的内源性物质对环泊酚和内标的检 理论质量浓 批内（n＝5） 批间（n＝3）
度/（ng/mL） 实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） RSD/% RE/% 实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） RSD/% RE/%
测均无干扰，符合 2020 年版《中国药典》（四部）的相关
15 14.72±1.00 6.79 －1.90 15.83±1.20 7.58 5.53
[13]
要求 。 30 30.60±1.61 5.26 2.00 31.76±1.05 3.31 5.87
2.4.2 线性关系考察 250 240.36±6.56 2.73 －3.86 247.13±10.46 4.23 －1.15
1 600 1 594.18±55.87 3.50 －0.36 1 619.78±38.12 2.35 1.24
取系列环泊酚对照品溶液5 μL，加入大鼠空白血浆
2.4.4 提取回收率和基质效应考察
95 μL，涡旋1 min后，配制成质量浓度分别为15、30、60、
按照“2.4.3”项下方法制备低、中、高质量浓度的质
125、250、500、1 000、2 000 ng/mL 的环泊酚模拟血浆样
控血浆样品溶液，每质量浓度平行 5 份，按“2.3”项下方
品，按“2.3”项下方法处理并按“2.1”项下条件进样测定，
法处理并按“2.1”项下条件进样测定，记录待测物峰面积
记录峰面积。以环泊酚质量浓度（x）为横坐标、环泊酚
（A）；取不同来源的空白血浆，按“2.3”项下方法处理，得
与内标峰面积的比值（y）为纵坐标，采用加权最小二乘
到空白基质溶液，加入相应质量浓度的环泊酚质控工作
2
法（权重为 1/x）进行线性回归。结果显示，环泊酚的线
液和内标溶液，制得与上述质控血浆样品溶液质量浓度
－4
－3
2
性回归方程为y＝1.907×10 x+5.050×10 （R ＝0.999 2），
相同的样品溶液，按“2.1”项下条件进样测定，记录待测
用于检测的线性范围为 15～2 000 ng/mL，定量下限为
物峰面积（B）；取低、中、高质量浓度的环泊酚质控工作
15 ng/mL。
液，加 50% 乙腈，制得与上述质控血浆样品溶液质量浓
2.4.3 精密度与准确度试验 度相同的样品溶液，按“2.1”项下条件进样测定，记录待
取定量下限、低、中、高质量浓度的环泊酚质控工作 测物峰面积（C）。按下式计算提取回收率和基质效应因
液 5 μL，加入大鼠空白血浆 95 μL，涡旋 1 min 后，配制 子，提取回收率＝A/B×100%，基质效应因子＝B/C×
成质量浓度分别为15、30、250、1 600 ng/mL的质控血浆 100%；以环泊酚的基质效应因子除以内标的基质效应
样品溶液，每质量浓度平行 5 份，于同一天内按“2.3”项 因子计算归一化基质效应因子。结果（表 2）显示，环泊
下方法处理并按“2.1”项下条件进样测定，记录峰面积， 酚的平均提取回收率为 99.37%～102.77%，RSD 不超过
计算批内精密度和准确度；连续 3 d 按“2.3”项下方法处 10%（n＝5）；内标的平均提取回收率为103.79%，RSD为
理并按“2.1”项下条件进样测定，计算批间精密度和准确 3.51%（n＝5）；环泊酚的平均归一化基质效应因子为
度。精密度和准确度分别用相对标准偏差（relative stan‐ 96.67%～102.55%，RSD均小于8%（n＝5）。
4.2 4.2
120
5 700 7 800
5 000 7 000
100
6 000
4 000
80 5 000
环泊酚 intensity 60 intensity 3 000 intensity 4 000
40 2 000 3 000
2 000
20 1 000 1 000
0 0 0
0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
t/min t/min t/min
4.2 4.2
180
6 000 6 000
150
5 000 5 000
120 4 000 4 000
氘代环泊酚 intensity 90 intensity 3 000 intensity 3 000
60
2 000
2 000
30 1 000 1 000
0 0 0
0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
t/min t/min t/min
A.空白血浆 B.模拟血浆样品（250 ng/mL） C.大鼠血浆样品
图1 大鼠血浆样品中环泊酚和内标的LC-MS/MS图谱

中国药房 2025年第36卷第2期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 2 · 181 ·