Page 58 - 《中国药房》2025年1期
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冠心病属于心血管相关疾病，具有高致残率及高致                          为 kl-5181R、kl230Ra21）均购自上海康朗生物科技有限
          死率，其主要是由于沉积物积聚促使冠状动脉狭窄、阻                            公司；兔源剪切型 caspase-3（cleaved-caspase-3）抗体（批
          塞，引发心肌组织缺氧、缺血、坏死等损伤，导致患者出                           号 9661T）购自上海远慕生物科技有限公司；兔源 Bcl-2
          现心绞痛、心悸、呼吸急促、乏力等症状，若不及时治疗，                          抗体（批号 FNab00839）购自武汉菲恩生物科技有限公
          还可加剧损伤，引发心肌梗死、心力衰竭，甚至威胁患者                           司；兔源β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号k10085）购自北
                    [1]
          的生命安全 。目前，冠心病的临床治疗主要通过服用                            京 百 奥 莱 博 科 技 有 限 公 司 ；TUNEL 试 剂 盒（批 号
          防血栓类药物以防止冠状动脉阻塞，但现有治法服药周                            Y1040S）购自优利科（上海）生命科学有限公司；4′，6-二
          期长且难以消除病根，因此迫切需要寻求新型特效药以                            脒基-2-苯基吲哚（4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）
                      [2]
          缓解患者病情 。                                            染色液（批号 B1061）购自北京普利莱基因技术有限公
              益母草碱提取自中药益母草，具有降血脂、溶栓、保                         司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的免疫球蛋白 G 二抗
          护心血管等多种药理作用，被广泛应用于心血管相关疾                           （批号abs20002）购自爱必信（上海）生物科技有限公司。
          病的治疗。已有研究显示，益母草碱可减轻血管紧张素                            1.3 实验动物
          Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）诱导的小鼠心脏肥大、纤维                      60只7周龄、体重（200±20） g的SPF级正常健康雄
                                                     [3]
          化和炎症，抑制心脏损伤和功能障碍，改善心功能 。生                           性 SD 大鼠[动物生产许可证号 SCXK（豫）2022-0001]购
          长停滞特异性蛋白 6（growth arrest-specific protein-6，        自河南省实验动物中心。所有大鼠饲养于温度 21～
          GAS6）/酪氨酸蛋白激酶受体（Axl）信号通路在维持心脏                       23 ℃、相对湿度55%、12 h光/12 h暗交替的环境中，饲养
          正常功能中具有重要作用，激活GAS6/Axl-AMP活化蛋                       期间自由摄食、饮水。本研究方案已获得河南利欣制药
          白质激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）信号通          股份有限公司动物伦理委员会审批（审批号 2022-
          路可抑制过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激损伤，抑制                            030195）。
                       [4]
          心肌细胞凋亡 。本研究通过探究益母草碱对 GAS6/                          2 方法
          Axl 信号通路的影响，阐明其减轻冠心病大鼠心肌损伤                          2.1 冠心病大鼠模型构建
          的机制，以期为冠心病的治疗寻求新策略。                                     大鼠适应性喂养1周后，选取12只正常健康大鼠喂
          1 材料                                                养普通饲料作为对照组。剩余 48 只大鼠进行冠心病造
          1.1 主要仪器                                            模，具体造模方法及成模判断标准如下：先以高脂饲料
              本研究所用主要仪器包括 ReadMax 1500 型酶标仪                  （87.3% 基础饲料+10% 猪油+2% 胆固醇+0.5% 牛磺胆
         （上海闪谱生物科技有限公司）、RX50型显微镜[思科诺                          酸钠+0.2% 丙基硫氧嘧啶）喂养 6 周，再连续注射 5
          思生物科技（北京）有限公司]、4200SF 型凝胶成像分析                       mg/（kg·d）盐酸异丙肾上腺素 3 d，每天 1 次。大鼠注射
          系统（上海天能科技有限公司）等。                                    药物期间仍用高脂饲料喂养。注射 3 d 后，用 30 mg/kg
          1.2 主要药品与试剂                                         戊巴比妥钠麻醉大鼠并连接心电图，观察其心电图 ST
              益母草碱对照品（批号 yb-019，纯度≥98%）购自上                    段变化，当 ST 段抬高≥0.1 mV 表明冠心病大鼠模型构
                                                                    [5]
          海钰博生物科技有限公司；GAS6/Axl 信号通路抑制剂                        建成功 。
          R428对照品（批号ab141364，纯度＞98%）购自英国Abcam                 2.2 分组与给药
          公司；肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、              将造模成功的 48 只大鼠按随机抽样方法分为模型
          白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6 酶联免疫吸           组，益母草碱低、高剂量组（益母草碱-L、益母草碱-H组，
          附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为 ER006、ER008-16、                 分别灌胃25、100 mg/kg的益母草碱+腹腔注射75 mg/kg
          ER003-48）均购自上海吉泰依科赛生物科技有限公司；                        的生理盐水 ），益母草碱高剂量+GAS6/Axl信号通路抑
                                                                        [6]
          肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）、肌          制剂组（益母草碱-H+R428组，灌胃100 mg/kg的益母草
                                                                                        [7]
          钙蛋白Ⅰ（troponin Ⅰ，cTnⅠ）、肌红蛋白（myoglobin，               碱+腹腔注射75 mg/kg的R428 ），每组12只。各给药组
          Mb）ELISA 试剂盒（批号分别为 JLC15558、JLC14924、               大鼠给予相应药物，对照组和模型组大鼠灌胃并腹腔注
          JLC15548）均购自江西江蓝纯生物试剂有限公司；兔源                        射等体积生理盐水，每天1次，连续48 d。
          胱天蛋白酶 3（caspase-3）、B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lym‐            2.3 大鼠心功能检测
          phoma-2，Bcl-2）相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，       给药结束后 24 h，用戊巴比妥钠麻醉大鼠，超声心
          Bax）抗体（批号分别为LM-0081R、LM0057）均购自上海                   动图监测5个周期（1个周期0.10～0.16 s）的左室射血分
          联迈生物工程有限公司；兔源 GAS6 抗体（批号 BK-                        数（left ventricular ejection fraction，LVEF），取均值作为
          KT17001）购自上海帛科生物技术有限公司；兔源磷酸                         最终结果，计算左室短轴缩短率（left ventricular frac‐
          化 Axl（phosphorylated Axl，p-Axl）、Axl 抗体（批号分别         tional shortening，LVFS）及二尖瓣环舒张早期与舒张晚


          · 52 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 1                                中国药房  2025年第36卷第1期
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