Page 52 - 《中国药房》2025年1期
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2.2.3 色谱条件、系统适用性试验与方法学考察 称定质量；超声提取30 min，取出放冷后补足减失质量，
本实验色谱条件参考文献[8]设置，以 Agilent Zor‐ 摇匀，滤过，取续滤液，过0.22 μm微孔滤膜，即得。
bax ODS C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以甲 2.3.3 色谱条件、系统适用性试验与方法学考察
醇-0.1% 磷酸溶液（V/V，8∶92）为流动相进行等度洗脱， 本实验色谱条件参考文献[10]设置。以 Agilent
流速为 0.8 mL/min；柱温为 25 ℃，检测波长为 273 nm， Zorbax ODS C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以
进样量为 10 μL，洗脱时间为 18 min。分别吸取空白对 四氢呋喃-水-乙酸（V/V/V，2∶80∶1.5）为流动相进行等度
照溶液（50% 甲醇）和“2.2.1”“2.2.2”项下混合对照品溶 洗脱，检测波长为 380 nm，流速为 0.8 mL/min，柱温为
液、煨大黄供试品溶液适量进样测定，记录色谱图。结 30 ℃，进样量为 10 μL，洗脱时间为 20 min。分别吸取
果显示，各成分分离度均大于1.5，理论板数按没食子酸 空白对照溶液（0.1% 碳酸氢钠溶液）和“2.3.1”“2.3.2”项
峰计均不低于 10 000，空白对照溶液对测定无干扰，具 下混合对照品溶液和供试品溶液（煨大黄）适量进样测
体见图1（空白对照溶液图略）。参考2020年版《中国药 定，记录色谱图。结果显示，各成分分离度均大于 1.5，
[9]
典》（三部）9101 分析方法验证指导原则 进行方法学考 理论板数按番泻苷B峰计均不低于7 000，空白对照溶液
察。结果显示，没食子酸和 5-HMF 的回归方程分别为 对测定无干扰，具体见图 2（空白对照溶液图略）。参考
Y＝36.025 X－120.490、Y＝72.793X－2.000（r≥0.999 2）， 2020 年版《中国药典》（三部）9101 分析方法验证指导原
[9]
线性范围分别为3.575～457.600、0.320～40.880 μg/mL； 则 进行方法学考察。结果显示，番泻苷 A 和番泻苷 B
的回归方程分别为Y＝7.640 7 X－1.906 6、Y＝8.5195 X－
精密度试验、重复性试验、稳定性试验（24 h）的 RSD 均
1.311 5（r≥0.999 9），线性范围分别为 3.090～98.840、
小于 2.00%（n＝6）；平均加样回收率分别为 103.3%、
1.610～51.540 μg/mL；精密度试验、重复性试验、稳定性
98.75%（RSD 分别为 0.44%、0.36%，n＝6）。以上均符合
试验（24 h）的 RSD 均小于 2.00%（n＝6）；平均加样回收
指导原则相关要求。
率分别为 99.11%、97.12%（RSD 分别为 1.79%、1.32%，
1
200
150 n＝6）。以上均符合指导原则相关要求。
mAU 100 2
50 2 32
31 1
0 30
29
0 3 6 9 12 15 18 mAU 28
t/min 27
26
A.混合对照品溶液 25
0 5 10 15 20
350 t/min
300
250 A.混合对照品溶液
mAU 200 1 32
150
100 2 30
50 28
0 mAU 26 2
0 3 6 9 12 15 18 24 1
t/min 22
20
B.供试品溶液（煨大黄） 0 5 10 15 20
1：没食子酸；2：5-HMF。 t/min
图1 没食子酸和5-HMF的系统适用性试验HPLC图 B.供试品溶液（煨大黄）
1：番泻苷B；2：番泻苷A。
2.3 番泻苷A和番泻苷B的含量测定方法建立 图2 番泻苷A和番泻苷B的系统适用性试验HPLC图
2.3.1 混合对照品溶液制备 2.4 游离蒽醌和结合蒽醌的含量测定方法建立
精密称取番泻苷A对照品7.06 mg和番泻苷B对照 游离蒽醌和总蒽醌的含量均以芦荟大黄素、大黄
品 8.59 mg，加 0.1% 碳酸氢钠溶液定容于不同 10 mL 容 酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5种成分的总量计，结
量瓶中 ，配制成含番泻苷 A 0.706 mg/mL、番泻苷 B 合蒽醌的含量以芦荟大黄素苷、大黄酸苷、大黄素苷、大
0.859 mg/mL的对照品储备液；分别精密吸取番泻苷A、 黄酚苷和大黄素甲醚苷5种成分的总量计（但定量分析
番泻苷 B 对照品储备液 1.40、0.60 mL，混合，加 0.1% 碳 时，各蒽醌苷类成分含量以对应苷元含量计），其中结合
酸氢钠溶液制成番泻苷 A、番泻苷 B 质量浓度分别为 蒽醌含量＝总蒽醌含量－游离蒽醌含量。
98.84、51.54 μg/mL的混合对照品溶液。 2.4.1 混合对照品溶液的制备
2.3.2 供试品溶液制备 精密称取芦荟大黄素对照品 0.40 mg、大黄酸对
取生大黄（或煨大黄）粉末约0.5 g（过四号筛），精密 照 品 0.84 mg、大黄素对照品 0.52 mg、大黄酚对照品
称定，置于具塞锥形瓶中，加0.1%碳酸氢钠溶液25 mL， 1.84 mg、大黄素甲醚对照品0.44 mg，加甲醇定容至同一
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