Page 45 - 《中国药房》2025年1期
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地屈孕酮片（批号363775，规格10 mg/片）购自荷兰                  2.2 大鼠分组、造模与给药
          Abbott Healthcare Products B.V. 公司；米非司酮片（批号            将 60 只雌性大鼠与 30 只雄性大鼠按雌雄比 2∶1 合
          43210213，25 mg/片）购自华润紫竹药业有限公司；氨基                   笼过夜配种，于次日清晨观察雌性大鼠有无阴道栓，有
          甲酸乙酯（批号 20221014）购自天津市光复科技发展有                      阴道栓者记为妊娠第 1 天；待 60 只雌性大鼠全部妊娠

          限 公 司 ；苏 木 素 染 色 液 、伊 红 染 色 液（批 号 分 别 为            后，随机分为正常组、模型组、地屈孕酮组（0.002 g/kg，剂
          190805、20211009）购自福州飞净生物科技有限公司；三                   量根据临床等效剂量换算而得）和庞氏安胎止血汤低、
          碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine，T3）、甲状腺素（thy‐             中、高剂量组（11.025、22.05、44.10 g/kg，中剂量为临床等
          roxine，T4）测定试剂盒（批号分别为 H222-1-2、H223-1-             效剂量），每组10只。从妊娠第1天起，正常组和模型组
          2）购自南京建成生物工程研究所；大鼠白细胞介素2（in‐                       大鼠灌胃蒸馏水，各给药组大鼠灌胃相应药液，给药体
          terleukin-2，IL-2）、IL-4、IL-6、IL-10、γ干扰素（interferon-γ，  积均为 10 mL/kg，每天 1 次，连续 12 d。另外，除正常组
          IFN-γ）酶联免疫吸附测定试剂盒（批号分别为 MM-                        外，其余各组大鼠均在灌胃蒸馏水/药液的同时灌胃温阳
          0192R2、MM-0191R1、MM-0190R1、MM-0195R1、MM-           中药药液 10 g/kg；第 13 天，除正常组外，其余各组大鼠
          0198R1）购 自 江 苏 酶 免 实 业 有 限 公 司 ；兔 抗 大 鼠            按5 mg/kg灌胃米非司酮（临用时以蒸馏水溶解）以建立
          NLRP3、ASC、caspase-1 抗体和辣根过氧化物酶标记的                  大鼠热证自然流产模型。以造模大鼠血清中 T3、T4 水
                                                                                              [8]
          山羊抗兔 IgG 二抗、DAB 显色试剂盒（批号分别为                        平和流产率升高为标准判定造模成功 。最终，各组大
          GB114320-100、GB115270-100、GB11383-100、G1213-       鼠无死亡，造模大鼠均造模成功。
          100UL、G1212-200T）购自武汉赛维尔生物科技有限                     2.3 大鼠取材和流产率及子宫系数的计算
          公司。                                                    末次给药 24 h 后，称定各组大鼠体重，然后腹腔注
          1.3 实验动物                                           射氨基甲酸乙酯（1 g/kg）麻醉，腹主动脉取血，以 3 000

              60只健康雌性未产SD大鼠（10周龄，体质量200～                     r/min离心10 min，取上清液于－80 ℃下储存，备用。解
          280 g）和 30 只健康雄性 SD 大鼠（10 周龄，体质量 250～              剖大鼠取妊娠子宫，观察胚胎颜色（正常胚胎呈淡红色，
          280 g）均由郑州市惠济区华兴实验动物养殖场提供，动                        宫内未见瘀血；流产胚胎呈黑褐色，胚胎部分消失），统
          物生产许可证号为 SCXK（豫）2022-0002。所有大鼠饲                    计各组大鼠流产胚胎数和正常胚胎数，并称定妊娠子宫
          养于河南中医药大学医学机能实验室，室温为 20～                           质量，计算流产率[流产率＝流产胚胎数/（流产胚胎数+
          22 ℃，相对湿度为55%～60%，正常光照，大鼠自由饮水                      正常胚胎数）×100%]和子宫系数（子宫系数＝子宫质
          采食。本实验获河南中医药大学实验动物伦理委员会                            量/体重）。观察结束后，去除妊娠子宫周围组织，经生理
          批准，编号DWLL202201012。                                盐水洗涤后，称重，拍照，然后将妊娠子宫一分为二，其
          2 方法                                               中一份用 4% 多聚甲醛固定，另一份用液氮速冻后于
          2.1 分子对接实验                                         －80 ℃下储存用于后续实验。
                                     [9]
              根 据 本 课 题 组 前 期 研 究 ，从 PubChem 数 据 库           2.4 大鼠血清中 T3、T4、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ
         （https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）中下载庞氏安胎止         水平检测
          血汤主要活性成分莫诺苷、绿原酸、芍药苷、芒果苷、异                              取“2.3”项下血清样品，室温溶解，按照试剂盒说明
          阿魏酸、甘草苷、菊苣酸、迷迭香酸、荷叶碱、黄芩苷、木                         书方法操作，然后采用酶标仪检测大鼠血清中 T3、T4、
          犀草素、芹菜素、白术内酯Ⅲ的结构文件，经Open Babel                     IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ水平。
          GUL 转换成 PDB 结构文件；再从 PDB 数据库（https：//               2.5 大鼠妊娠子宫的病理形态观察

          www.rcsb.org）下载 NLRP3、ASC、pro-caspase-1 蛋白结            取“2.3”项下固定的妊娠子宫，经梯度乙醇脱水、二
          构文件。利用 AutoDock Tools 1.5.7 软件将庞氏安胎止               甲苯透明、石蜡包埋、切片（4 μm）等过程制作病理切片；
          血汤的主要活性成分与NLRP3、ASC、pro-caspase-1蛋白                取部分切片经二甲苯脱蜡、HE 染色、梯度乙醇脱水后，
          进行分子对接（若结合能＜－5 kJ/mol，说明两分子具有                      以中性树胶封片，采用光学显微镜观察大鼠妊娠子宫的
          亲和力，且结合能数值越低，表示两分子结合越稳定），                          病理形态变化，并拍照。
          最后采用 PyMOL 软件分析分子对接结果，预测庞氏安                        2.6 大鼠妊娠子宫中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达
          胎止血汤主要活性成分与NLRP3、ASC、pro-caspase-1蛋                水平检测
          白之间的结合活性。                                              取“2.3”项下妊娠子宫切片，经二甲苯脱蜡、水化后，


          中国药房  2025年第36卷第1期                                                  China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 1    · 39 ·
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