Page 39 - 《中国药房》2025年1期
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2.2.6 方法学考察 高2个质量浓度的质控工作液，每个浓度平行制备3份，
（1）专属性考察：分别取大鼠空白血浆、空白血浆+ 分别考察室温下放置6 h、在自动进样器放置24 h、－20 ℃
对照品+内标、大鼠给药后 45 min 的血浆+内标，按照 放置72 h、反复冻融3次、－80 ℃放置30 d后的稳定性。
“2.2.5”项下方法处理，并按“2.2.1”“2.2.2”项下条件进样 2.2.7 药动学分析
分析，记录色谱图。 单药组与联合给药组大鼠于于第 15 天给药后 0、
（2）标准曲线与线性范围考察：精密吸取空白血浆 0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、10、12、24 h眼眶采
50 μL，加入系列浓度的混合对照品溶液5 μL，按“2.2.5” 血约0.3 mL于含肝素钠抗凝剂的离心管中，以3 500 r/min
项下方法处理，并按“2.2.1”“2.2.2”项下条件进样分析， 离心10 min，取上层血浆，置于－80 ℃冰箱保存，备用。
记录峰面积。以血浆中各成分质量浓度为横坐标（X）、 取上述血浆样品，按“2.2.5”项下方法处理后，按“2.2.1”
相应成分峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标（Y），采 “2.2.2”项下条件进样分析，记录峰面积，以内标法计算
用加权最小二乘法（权重系数为1/X）进行线性回归。 大鼠血浆样品中各成分的血药浓度。以时间为横坐标
2
（3）准确度与精密度考察：精密吸取空白血浆50 μL， （X）、大鼠血药浓度为纵坐标（Y）作图，得各成分的平均
加入定量下限、低、中、高质量浓度的质控工作液 5 μL， 血药浓度-时间曲线，通过 DAS 3.2.2 软件处理，采用非
得到待测成分定量下限、低、中、高质量浓度的质控血浆 房室模型计算各成分的药动学参数，其中血药浓度-时
样品，每个浓度平行制备6份，3 d内连续制备3批，每批 间 下 面 积（area under the curve，AUC；包 括 AUC0-t 和
随行一条标准曲线。按“2.2.5”项下方法处理，并按 AUC0-∞）采用梯形面积法计算，半衰期（t1/2 ）利用血药浓
“2.2.1”“2.2.2”项下条件进样分析，记录色谱图。以各质 度-时间曲线计算，药峰浓度（cmax ）和达峰时间（tmax ）为实
控样品的实测浓度相对其理论浓度的准确度（RE）和各 测值。
质控样品实测浓度的相对标准偏差（RSD）来表示日内、 2.3 统计学分析
日间准确度及精密度水平。 采用 SPSS 23.0 软件进行统计分析，采用 Graphpad
（4）基质效应考察：精密吸取空白血浆 50 μL（不加 Prism 9.0软件绘图。数据满足正态分布以x±s表示，多
内标），按“2.2.5”项下方法处理，离心后取上清，即为空 组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用
白基质。分别精密吸取低、高2个质量浓度的质控工作 SNK-q 检验。不满足正态分布以 M（P25，P75 ）表示，组间
液及内标各5 μL，再加入空白基质50 μL、50%甲醇110 比较采用非参数秩和检验。检验水准α＝0.05。
μL，涡旋 3 min，吸取 30 μL 于进样小瓶中，按“2.2.1” 3 结果
“2.2.2”项下条件进样分析，记录待测物峰面积A和内标 3.1 药效学实验结果
峰面积 C（每个浓度平行 3 个样品）。分别精密吸取低、 3.1.1 各组大鼠抑郁样行为参数比较
高 2 个质量浓度的质控工作液及内标各 5 μL，再加入 给药2周后，与空白对照组比较，阴性对照组大鼠体
50% 甲醇 160 μL，涡旋 3 min，吸取 30 μL 于进样小瓶 重、糖水偏好率、旷场运动总路程均显著降低或缩短，游
中，按“2.2.1”“2.2.2”项下条件进样分析，记录同一浓度 泳不动时间显著延长（P＜0.05）；与阴性对照组比较，阳
样品各待测物峰面积的均值A1（n＝3）及低、高2个浓度 性对照组、单药组和联合给药组大鼠体重、糖水偏好率、
样品内标峰面积的均值 C1（n＝6）。待测物基质效应因 旷场运动总路程均显著升高或延长，游泳不动时间显著
子（MEs）＝A/A1×100%，内标基质效应因子（MEi）＝C/ 缩短（P＜0.05）；与单药组比较，联合给药组大鼠抑郁样行
C1×100%，内标归一化的基质效应因子（ME）＝MEs/ 为参数变化差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表2。
MEi×100%，计算ME的RSD。 表2 各组大鼠抑郁样行为参数比较（x±s，n＝6）
（5）提取回收率考察：精密吸取空白血浆 50 μL，按 组别 体重/g 糖水偏好率/% 旷场运动总路程/mm 游泳不动时间/s
“2.2.5”项下方法处理，制备成低、中、高 3 个质量浓度的 空白对照组 349.79±35.07 94.88±6.79 6 380.74±2 351.42 105.96±36.95
阴性对照组 257.16±14.99 a 37.26±30.11 a 1 067.47±991.86 a 191.46±28.06 a
质控样品，并按“2.2.1”“2.2.2”项下条件分析，每个浓度
阳性对照组 303.24±19.61 b 89.01±10.36 b 5 955.06±2 195.67 b 115.09±38.28 b
平行 6 个样品。记录待测物峰面积 A3。另取空白血浆 单药组 292.01±22.33 b 85.09±7.06 b 5 117.62±1 481.52 b 110.30±25.55 b
50 μL，按“2.2.5”项下方法处理空白血浆（不加内标），离 联合给药组 302.19±25.22 b 88.59±4.24 b 5 913.64±2 688.57 b 88.80±39.74 b
心后上清为空白血浆溶液。分别加入低、中、高3个质量 a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与阴性对照组比较，P＜0.05。
浓度的质控工作液及内标工作液5 μL，再加入空白血浆 3.1.2 各组大鼠血清炎症因子水平比较
溶液50 μL、50%甲醇110 μL，涡旋3 min，吸取30 μL于 与空白对照组比较，阴性对照组大鼠血清IL-1β、IL-
进样小瓶中，按“2.2.1”“2.2.2”项下条件分析，每个浓度 6、TNF-α 水平均显著升高（P＜0.05）；与阴性对照组比
平行 6 个样品。记录待测物峰面积 A4 以及同一浓度样 较，单药组、联合给药组大鼠血清 IL-1β、IL-6、TNF-α 水
品各待测物峰面积的均值 A5（n＝6）。各成分的提取回 平均显著降低（P＜0.05）；与单药组比较，联合给药组大
收率＝A3/A5×100%。 鼠血清炎症因子水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结
（6）稳定性考察：精密吸取空白血浆50 μL，加入低、 果见表3。
中国药房 2025年第36卷第1期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 1 · 33 ·
