Page 38 - 《中国药房》2025年1期
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医院实验动物伦理委员会批准，批号为2023DW-048-01。                     后，迅速断头取脑，将脑组织置于4%多聚甲醛固定液中
          所有大鼠均适应性饲养7 d，保持12 h昼夜节律。                           保存，待用。取上述脑组织，进行常规石蜡包埋、切片，
          2 方法                                                苏木素-伊红（HE）染色后，使用中性树胶封片，于显微镜
          2.1 药效学实验                                           下观察其海马区病理形态学变化并拍照。
          2.1.1 造模、分组与给药                                      2.2 药动学实验
              将雄性SD大鼠30只按照随机数字表法分为空白对                         2.2.1 色谱条件
          照组、阴性对照组、阳性对照组、单药组、联合给药组，每                              色 谱 柱 为 Agilent  ZORBAX  SB-C18（100  mm×
          组6只。其中，阳性对照组大鼠灌胃氟西汀10 mg/kg，单                       3.0 mm，3.5 μm）；流动相为0.3%甲酸溶液（含1 mmol/L
          药组大鼠灌胃岩黄连总碱 210 mg/kg，联合给药组大鼠                       甲酸铵）-乙腈（60∶40，V/V）；柱温为 40 ℃；流速为 0.5
          灌胃岩黄连总碱210 mg/kg+冰片50 mg/kg（各给药组剂                   mL/min；进样量为5 μL。
          量依据前期预实验得出）。实验前大鼠正常供给饲料及                            2.2.2 质谱条件
          饮水，并进行 1% 蔗糖水训练。适应 7 d 后，采用 LPS 诱                       采用电喷雾离子源、多反应监测模式进行正离子扫
          导构建抑郁症大鼠模型，即除空白对照组大鼠腹腔注射                            描；离子源温度为 550 ℃；电喷雾电压为 5 500 V。各成
          等体积生理盐水外，其余各组大鼠每天腹腔注射 1 次                           分的质谱参数见表1。
          LPS（0.5 mg/kg），持续 7 d，进行行为学实验。确认造模                               表1 各成分的质谱参数
                [12]
          成功后 ，各给药组大鼠按 10 mL/kg 灌胃相应药液，其
                                                              成分                母离子m/z  子离子m/z  锥孔电压/V  碰撞电压/V
          间空白对照组及阴性对照组大鼠灌胃等体积溶解药物                             脱氢卡维丁              350.40  334.20  34.00  47.00
          的溶剂，连续15 d；给药期间仍需每天腹腔注射1次LPS                        延胡索乙素              356.60  192.10  93.00  29.00
          造模。由于阳性对照药的作用机制已比较清楚，后文仅                            黄连碱                320.10  292.10  75.00  40.00
                                                              巴马汀                352.20  336.10  57.00  44.00
          用于大鼠抑郁样行为学检测。                                       药根碱                338.20  322.20  60.00  40.00
          2.1.2 大鼠抑郁样行为学检测                                    小檗碱                336.10  320.00  49.00  41.00
             （1）体重：实验开始前，记录大鼠体重；实验过程中，                        小檗红碱               322.10  307.20  70.00  40.00
                                                              表小檗碱               336.10  320.00  49.00  41.00
          每 2 d 称重并记录一次大鼠体重，用以分析造模和给药
                                                              氢溴酸右美沙芬（内标）        272.30  147.10  85.00  39.00
          期间大鼠的体重变化。（2）糖水偏好实验：造模前，对大
                                                              2.2.3 对照品溶液
          鼠先进行3 d的糖水偏好适应性训练。糖水测试前禁水
                                                                  精密称取脱氢卡维丁、延胡索乙素、黄连碱、巴马
          不禁食12 h，进行行为学测试时，所有大鼠置于单笼，每
                                                              汀、药根碱、小檗碱、小檗红碱、表小檗碱对照品适量，加
          笼笼盖上放一瓶1%（m/V）蔗糖水溶液和纯水，测试时间
                                                              甲醇溶解，定容，配制成质量浓度分别为 4.00、2.00、
          为4 h，中间每2 h时交换水瓶位置。测试结束前后分别
                                                              0.80、0.80、0.80、1.00、1.00、0.80 mg/mL 的对照品储备
          称量水瓶质量，计算糖水偏好率[糖水偏好率（%）＝糖水
                                                              液。分别精密吸取对照品储备液适量，加50%甲醇逐级
          消耗量/（糖水消耗量+纯水消耗量）×100%]。（3）旷场实
          验：各组大鼠在给药2周时进行旷场实验。开始之前，将                           稀释制成8个不同质量浓度的混合对照品标准曲线工作
                                                              液。精密吸取各储备液适量，用50%甲醇稀释成低、中、
          大鼠挪至行为学房间，关灯适应1 h。测试时，将大鼠背
          对实验者轻轻置于长、宽、高均为1 m的实验箱中央自由                          高质量浓度（脱氢卡维丁0.060、1.260、7.200 ng/mL，延胡
          探索5 min，使用摄像机记录各大鼠在箱内的运动轨迹，                         索乙素 0.045、1.680、9.600 ng/mL，黄连碱 0.006、0.210、
          用动物行为学软件分析大鼠旷场运动总路程。（4）强迫                           1.200 ng/mL，巴马汀 0.030、0.210、1.200 ng/mL，药根碱
          游泳实验：将大鼠放入透明的有机玻璃圆筒（直径 20                           0.030、0.210、1.200  ng/mL，小 檗 碱 0.024、0.280、1.600
          cm，高 50 cm）中，设置水深 40 cm，水温 20～25 ℃。使                ng/mL，小檗红碱 0.009、0.210、1.200 ng/mL，表小檗碱
          用动物行为学软件记录 6 min 内的后 4 min 大鼠的游泳                    0.030、0.210、1.200 ng/mL）的质控工作液。上述溶液均
          不动时间（大鼠在水中停止挣扎，一动不动呈漂浮状态，                           于4 ℃下保存，备用。
          或只有细小的肢体运动以保持头部浮在水面上，认为其                            2.2.4 内标溶液
                      [13]
          是静止不动的 ）。                                               精密称取适量氢溴酸右美沙芬对照品，加甲醇溶解
          2.1.3 大鼠血清炎症因子水平检测                                  并定容，配制成质量浓度为 2.11 mg/mL 的内标储备液。
              末次给药后，于各组大鼠腹主动脉取血，静置 30                         精密吸取上述储备液适量，加 50% 甲醇稀释，得质量浓
          min，以 4 000 r/min 离心 10 min，分离上层血清，根据               度为15.0 ng/mL的内标工作液，于4 ℃下保存，备用。
          ELISA 试剂盒说明书操作，以酶标仪检测 IL-1β、IL-6、                   2.2.5 血浆样品处理
          TNF-α水平。                                                精密吸取血浆样品50 μL，依次加入内标工作液5 μL、
          2.1.4 大鼠海马组织病理形态学变化观察                               乙腈 110 μL，涡旋 3 min，于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心
              末次给药后，每组随机取 2 只大鼠麻醉后用生理盐                        10 min，吸取上清液60 μL，再次于4 ℃下以12 000 r/min
                                                                                         [14]
          水灌注，再用多聚甲醛灌注至头部及四肢，待肌肉僵硬                            离心10 min，取5 μL上清液进样 。

          · 32 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 1                                中国药房  2025年第36卷第1期
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