Page 61 - 《中国药房》2024年23期
P. 61

1.3 细胞株及动物                                         37.71%、21.83%。该结果提示，CBD-CCMC纳米胶束中
              Caco-2细胞株（批号CL-0050）购自武汉普诺赛生命                  药物的释放具有pH依赖性，且表现出良好的缓释性能。
          科技有限公司。本研究所用动物为健康雄性 SD 大鼠，                         2.1.3 形态学考察
          共 60 只，6～7 周龄，体重（220±20） g，购自斯贝福（北                     取 CBD-CCMC 纳米胶束样品以水溶解，配制成质
          京）生物技术有限公司，动物生产许可证号为SCXK（京）                        量浓度为 1 mg/mL 的胶束溶液，于冰水浴中超声 10
          2019-0010。实验开始前大鼠先适应性饲养7 d。本研究                     min，铜网打捞，以滤纸吸去多余液体，置于空气中自然
          中动物实验经山西中医药大学实验动物伦理委员会审                            干燥，即得待测样品，采用透射电镜观察其形态。结果
          核通过后实施，伦理号为AWE202209101。                           显示，CBD-CCMC 纳米胶束能在水中自组装形成粒径
          2 方法与结果                                            均匀、分散良好的类球形胶束。结果见图1。
          2.1 CBD-CCMC纳米胶束的制备与表征
          2.1.1 CBD-CCMC纳米胶束的制备
              采用透析法制备 CBD-CCMC 纳米胶束，具体操作
          如下：精密称取CBD原料药2 mg溶解于2 mL四氢呋喃
          中，作为有机相；称取 CCMC 空白纳米胶束粉末 48 mg
          溶解于 12 mL 水中，于 25 ℃下搅拌 30 min 得到空白纳
          米胶束溶液，作为水相。将有机相逐滴加入水相，持续
          搅拌 10 h 后将反应液转移至透析袋中透析 24 h，以 0.45                       图1 CBD-CCMC纳米胶束的透射电镜图
          μm 有机滤膜过滤，收集滤液，冻干后即得 CBD-CCMC                      2.2 血浆和组织样品中CBD含量测定方法的建立
          纳米胶束。                                              2.2.1 溶液配制
          2.1.2 纳米胶束的表征                                          内标工作液配制：精密称取苯海拉明对照品 5 mg，
             （1）Zeta 电位、粒径、多分散性指数（polydispersity             置于 10 mL 容量瓶中，以甲醇溶解、定容，混匀，得内标
          index，PDI）、载 药 量 及 包 封 率 测 定 ：制 备 3 批 CBD-         储备液；取上述储备液，以甲醇稀释，得质量浓度为 10
          CCMC纳米胶束，测定其表面Zeta电位、粒径大小、PDI，                     ng/mL的内标工作液。CBD工作液配制：精密称取CBD
          并计算载药量和包封率。结果显示，所制纳米胶束的                            对照品10 mg，以甲醇溶解于10 mL容量瓶中并定容，得
          Zeta 电 位 为（－13.5±1.2）  mV，平 均 粒 径 为（230.6±         质量浓度为1 mg/mL的CBD工作液，4 ℃保存。
          1.8） nm，PDI 为 0.170±0.053，载药量为（9.18±0.32）%，        2.2.2 样品处理
          包封率为（86.35±0.56）%。                                    （1）血浆样品：取大鼠血浆 100 μL，加无水甲醇 200
             （2）溶解度：分别称取等量（以CBD量计）的CBD原                      μL、内标工作溶液 10 μL，涡旋混匀 1 min，静置 20 min
          料药及CBD-CCMC纳米胶束，加水搅拌48 h。离心，取                      后，以12 000 r/min离心10 min，重复3次，取上层溶液进
          上清液1 mL加9 mL乙腈，过滤，采用高效液相色谱法检                       样测定。
          测CBD含量并计算其溶解度 。结果显示，CBD的溶解                            （2）组织样品：分别称取大鼠心、肝、脾、肺、肾、肌肉
                                  [6]
          度为 0.124 μg/mL，CBD-CCMC纳米胶束中CBD的溶解                 组织各 100 mg，置于研磨管中，加水至 1 mL，加入甲醇
          度为68.240 μg/mL，水溶性增加了约550倍。                        50 μL进行组织研磨。取匀浆液100 μL，加入内标工作
             （3）稳定性：取 3 份 CBD-CCMC 纳米胶束放入西林                  液 10 μL、乙腈 100 μL、甲基叔丁醚 400 μL，涡旋混匀 1
          瓶中，分别于室温及37 ℃下放置7 d，测定7 d内载药胶                      min，以9 000 r/min离心5 min，取上层溶液400 μL，以氮
          束的粒径变化，观察载药纳米胶束稳定性。结果显示，                           气流吹干。残渣用甲醇 200 μL 复溶，以 12 000 r/min 离
          在室温或37 ℃下放置7 d，CBD-CCMC纳米胶束的粒径                     心5 min，重复3次，取上层溶液进样测定。
          无明显变化，具有良好的储存稳定性。                                  2.2.3 检测条件
             （4 ）体外释放性能：取 CBD-CCMC 纳米胶束，加水                       利用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法
          溶解后置于透析袋中，分别放置于20 mL pH5.5及pH7.4                   进 行 检 测 ，检 测 条 件 如 下 ：色 谱 条 件 —— 采 用
                                                                                       [6]
          的磷酸盐缓冲液[含0.5%吐温80（m/V）]中。分别于放置                     CORTECS C18 （150 mm×4.6 mm，2.7 μm）色谱柱 ，以
          0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、48、72、96、120、144 h时取样，      0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～2
          采用高效液相色谱法检测CBD含量 ，计算CBD累计释                         min，30%A；2～9 min，30%A→10%A；9～14 min，10%A→
                                        [6]
          放率。结果显示，CBD-CCMC 纳米胶束在 pH5.5 和                     30%A）；柱温为 30 ℃；流速为 0.3 mL/min；进样量为 5
          pH7.4 磷 酸 盐 缓 冲 液 中 的 144  h 累 计 释 放 率 分 别 为       μL。质谱条件——采用电喷雾离子源以多反应监测模


          中国药房  2024年第35卷第23期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 23    · 2891 ·
   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66