Page 63 - 《中国药房》2024年23期
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结果显示，给药 0.25 h 后，CBD 组、CBD-CCMC 纳 100%（其中 OD 处理孔表示药物处理后细胞上清液的 OD
米胶束组大鼠心、肝、肺组织中 CBD 质量浓度均较高， 值，OD 对照孔表示空白对照细胞上清液的 OD 值）。采用
表明CBD、CBD-CCMC纳米胶束经口服给药后，优先进 SPSS 20.0软件进行统计分析，所有数据均以x±s表示，
入大鼠心、肝和肺组织；相比于 CBD 组，CBD-CCMC 纳 多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用 LSD-t
米胶束组大鼠心、肝、肺组织中CBD质量浓度均显著升 检验，检验水准α＝0.05。实验重复3次，结果见表2。
高（P＜0.01）。随着时间的推移，药物逐渐向肝组织积 表2 不同检测方法下细胞活力测定结果（x±s，n＝6）
累，在给药1.5 h后，大鼠肝组织中CBD质量浓度达到最 组别 质量浓度/（μg/mL） 细胞存活率（CCK-8法）/％ LDH释放相对百分比（LDH释放法）/％
高，且 CBD-CCMC 纳米胶束组大鼠肝组织中 CBD 的质 空白对照组 － 100.00±3.00 100.00±5.00
LPS组 － 68.01±2.60 a 158.01±7.45 a
量浓度显著高于 CBD 组（P＜0.01），说明纳米胶束可延 LPS+CBD组 5 74.30±2.18 b 143.75±7.39
长 CBD 的消除时间。给药 10 h 后，CBD 在肝组织中的 10 85.01±1.62 c 130.28±5.71 c
质量浓度降低，表明其不易在体内蓄积。给药 24 h 后， 15 88.40±3.56 c 128.42±7.60 c
LPS+CBD-CCMC组 5 84.23±2.46 cd 136.38±5.67 b
各组织样品中 CBD 质量浓度均很低，已基本无治疗效 10 94.59±3.40 cd 119.54±4.76 c
果。值得注意的是，在给药后同一时间点，与CBD组比 15 94.24±2.75 ce 105.33±5.45 cd
较，CBD-CCMC 纳米胶束组大鼠各组织样品中 CBD 的 a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与LPS组比较，P＜0.05；c：与
LPS组比较，P＜0.01；d：与相同质量浓度LPS+CBD组比较，P＜0.01；
质量浓度均有所提升，表明 CBD 经 CCMC 纳米胶束负
e：与相同质量浓度LPS+CBD组比较，P＜0.05。
载后能促进其向各组织分布。
结果显示，与空白对照组比较，LPS 组细胞存活率
2.5 体外抗炎作用考察
显著降低（P＜0.01），LDH 释放相对百分比显著升高
2.5.1 细胞培养及单层模型建立
（P＜0.01）。与 LPS 组比较，不同质量浓度 LPS+CBD 组
将 Caco-2 细胞株接种于 MEM 培养基（含 10% 胎牛
及 LPS+CBD-CCMC 纳米胶束组细胞存活率均显著升
血清、1%青霉素-链霉素双抗）中，于37 ℃、5% CO2恒温培
高（P＜0.05 或 P＜0.01），LDH 释放相对百分比（除 5
养箱中培养，待细胞生长密度达90%以上时，将细胞以1×
μg/mL LPS+CBD 组外）显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。
5
10 个/mL 的密度接种于 Transwell 小室上室，共 0.5 mL；
与 LPS+CBD 组比较，相同质量浓度 LPS+CBD-CCMC
下室加入1.5 mL培养基。前1周后隔天换液，7 d后每天
纳米胶束组细胞存活率均显著升高（P＜0.05 或 P＜
2
换液，培养至 21 d。当细胞的 TEER 达 800 Ω·cm 且趋
0.01）。当质量浓度为 15 μg/mL 时，与 LPS+CBD 组比
于稳定时，表明已形成完整、紧密的细胞单层模型 [8―9] 。
较，LPS+CBD-CCMC纳米胶束组细胞LDH释放相对百
2.5.2 炎症细胞模型建立及实验分组
分比显著降低（P＜0.01）。
将 Caco-2 细胞分为空白对照组、LPS 组、LPS+CBD
2.5.4 TEER检测
组、LPS+CBD-CCMC 纳米胶束组，每组设置 6 个复孔。
将Caco-2细胞按照“2.5.2”项下方法分组处理，采用
基于建立的Caco-2细胞单层模型，空白对照组细胞用普
ERS-2型跨膜电阻仪分别检测给药后2、5、8、10 h Caco-2
通 MEM 培养基培养，其余各组细胞均以含 10 μg/mL
2
细胞的 TEER：TEER（Ω·cm）＝（Rt－R0 ）×A（式中，Rt为
[10]
LPS 的 MEM 培养基处理 24 h，以建立细胞炎症模型 。
接种有 Caco-2 细胞的实验孔测量值，R0 为没有接种
细胞炎症模型建立成功后（细胞活力显著下降），LPS+
Caco-2 细胞的空白孔测量值，A 为 Transwell 膜面积）。
CBD 组、LPS+CBD-CCMC 纳米胶束组细胞分别加入
TEER 测定结果（图 4）显示，与空白对照组比较，LPS 组
CBD 终质量浓度为 5、10、15 μg/mL 的 CBD 混悬液（加
细胞的TEER在0～5 h内迅速下降，并在8 h后趋向于稳
0.1% 二甲基亚砜助溶）或 CBD-CCMC 纳米胶束混悬液
定；与 LPS 组比较，LPS+CBD 组及 LPS+CBD-CCMC 纳
（以磷酸盐缓冲溶液为溶剂），LPS组和空白对照组细胞
米胶束组细胞在给药处理 5 h 后，TEER 明显升高，其中
加入等量磷酸盐缓冲溶液。
以LPS+CBD-CCMC纳米胶束组升高更为明显。
2.5.3 细胞活力检测
1 100
取“2.5.2”项下各组细胞，采用 CCK-8 法和 LDH 释 空白对照组
1 000
放法检测细胞活力。培养24 h后，利用酶标仪检测450、 900 LPS组
LPS+CBD组（5 μg/mL）
570 nm波长处的光密度（optical density，OD）值，按下式 （ Ω · cm 2 ） 800 LPS+CBD组（10 μg/mL）
计算细胞存活率：细胞存活率（%）＝OD 处理孔/OD 对照孔× TEER/ 700 LPS+CBD组（15 μg/mL）
LPS+CBD+CCMC组（5 μg/mL）
100%（式中，OD 处理孔表示加入药物后的细胞 OD 值， 600 LPS+CBD+CCMC组（10 μg/mL）
LPS+CBD+CCMC组（15 μg/mL）
OD 对照孔表示空白对照的细胞 OD 值）；通过测定 LDH 释 500
0 2 5 8 10
放量来表征细胞膜完整性，结果以LDH释放相对百分比 t/h
的形式呈现：LDH释放相对百分比（%）＝OD 处理孔/OD 对照孔× 图4 各组细胞的TEER测定结果（x±s，n＝6）
中国药房 2024年第35卷第23期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 23 · 2893 ·
