Page 51 - 《中国药房》2024年23期

列，以 20 批地菍石油醚提取物指纹图谱中 19 个共有峰 3.5
3.0
峰面积为比较序列，计算参考序列与比较序列的灰色关 2.5
2.0
1.5
联度值（即关联度），并对关联度大小进行排序，结果见 VIP值 1.0 0
0.5
－0.5
表 5。由表 5 可知，19 个共有峰与 NO、TNF-α 抑制率的 －1.0
－1.5
关联度均大于 0.7，具体为 0.781～0.923，表明共有峰与 17 9 19 13 5 6 15 1 14 16 3 7 2 12 4 8 18 10 11
峰号
药效指标间均有关联性 。由此可得，地菍石油醚提取 A.共有峰与NO抑制率的VIP值
[8]
物的抗炎作用是多成分协同起效的，其中以峰 16、15 对 1.0
应成分的贡献最大；关联度排名前8位的共有峰对应成 0.5 0
分均未知，但这些成分的保留时间靠后，说明其极性相 标准化回归系数 －0.5
－1.0
对较小，后续本课题组将进一步对其进行分离鉴定。 －1.5
－2.0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
表5 20批地菍石油醚提取物中各共有峰与炎症因子抑 峰号
制率的关联度测定结果 B.共有峰与NO抑制率的标准化回归系数
与NO抑制率的 与NO抑制率的 与TNF-α抑制率的 与TNF-α抑制率的 2.5
共有峰 2.0
关联度 关联度排名 关联度 关联度排名 1.5
峰16 0.923 1 0.901 1 VIP值 1.0
0.5
峰15 0.916 2 0.900 2 0
－0.5
峰13 0.904 3 0.872 7 －1.0
11 8 16 19 4 12 10 2 17 15 14 18 3 13 6 5 7 1 9
峰14 0.901 4 0.882 6
峰号
峰19 0.889 5 0.885 5 C.共有峰与TNF-α抑制率的VIP值
峰18 0.888 6 0.887 3
峰17 0.882 7 0.887 4 4 2
峰12 0.874 8 0.850 8 0
峰11 0.850 9 0.825 13 标准化回归系数 －2
－4
峰5（牡荆素） 0.847 10 0.839 10 －6
峰8 0.846 11 0.837 11 －8 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
峰10（木犀草素） 0.844 12 0.842 9 峰号
峰7（鞣花酸） 0.840 13 0.827 12 D.共有峰与TNF-α抑制率的标准化回归系数
峰6（异牡荆素） 0.830 14 0.821 14 图3 共有峰与 NO、TNF-α 抑制率的 VIP 值及标准化
峰1 0.818 15 0.815 16 回归系数
峰4 0.808 16 0.816 15
峰2 0.790 17 0.796 17 呈正相关；其余共有峰与TNF-α抑制率的标准化回归系
峰3 0.786 18 0.790 18
峰9（槲皮素） 0.781 19 0.781 19 数均小于0，提示其与TNF-α抑制率呈负相关（图3D）。
2.4 地菍石油醚提取物抗炎活性成分验证
2.3.2 偏最小二乘回归分析
分子对接是一种研究小分子配体与蛋白质受体之
在偏最小二乘回归分析中，回归系数的绝对值可反
间相互作用的理论方法，可针对某一特定的靶标蛋白，
映共有峰对药效指标的贡献程度，其数值越大，则贡献
筛选出具有活性的化合物 [10―11] 。通过谱效关联分析发
越大；变量重要性投影（variable importance in projection，
现，牡荆素、异牡荆素、槲皮素、木犀草素均为地菍发挥
VIP）值可解释自变量对因变量的贡献程度，当VIP值＞
[9]
1 时，则表明自变量对因变量有显著贡献 。本研究以 抗炎活性的重要成分。牡荆素、异牡荆素、槲皮素与NO
20批地菍石油醚提取物指纹图谱中19个共有峰的峰面 抑制率呈正相关，而诱导型一氧化氮合酶（inducible ni‐
积为自变量，以NO、TNF-α抑制率为因变量，采用SIMCA tric oxide synthase，iNOS）可高效产生 NO，从而导致炎
[12]
14.1软件进行偏最小二乘回归分析，结果见图3。 症 。因此，本研究选择iNOS为靶点蛋白与牡荆素、异
结果显示，峰 17、9、19、13、5（牡荆素）、6（异牡荆 牡荆素、槲皮素进行分子对接。鞣花酸、木犀草素与
素）、15 与 NO 抑制率的 VIP 值均大于 1（图 3A）。峰 19、 TNF-α抑制率呈正相关，故本研究选择TNF-α为靶点蛋
13、9（槲皮素）、12、5（牡荆素）、6（异牡荆素）、8、7（鞣花 白与鞣花酸、木犀草素进行分子对接。通过 TCMSP 数
酸）、18、1 与 NO 抑制率的标准化回归系数均大于 0，提 据库（https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）查找活性成分
示其与 NO 抑制率呈正相关；其余共有峰与 NO 抑制率 并保存为 mol2 格式，在 PDB 数据库（http：//www.rcsb.
的标准化回归系数均小于 0，提示其与 NO 抑制率呈负 org/）中找到iNOS、TNF-α蛋白质受体结构并保存为pdb
相关（图 3B）。峰 11、8、16、19、4、12、10（木犀草素）与 格式，通过AutoDock Tools 1.5.7软件设置对接参数。使
TNF-α抑制率的VIP值均大于1（图3C）。峰8、10（木犀 用 Autodock Vina 软件进行分子对接，并计算最低结合
草素）、13、15、3、19、17、7（鞣花酸）、18、1 与 TNF-α 抑制 能。结果显示，牡荆素、异牡荆素、槲皮素与 iNOS 蛋白
率的标准化回归系数均大于 0，提示其与 TNF-α 抑制率 质受体的结合能均小于－5.0 kcal/mol。

中国药房 2024年第35卷第23期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 23 · 2881 ·