Page 48 - 《中国药房》2024年23期
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地菍为野牡丹科植物地菍 Melastoma dodecandrum               海陶术生物科技有限公司；NO 试剂盒（批号 S0021S-3）
          Lour.的全草，又名嘎狗噜，是畲族特色药，其性凉，味甘、                       购自上海碧云天生物科技有限公司；TNF-α酶联免疫吸
          涩，具有活血止血、清热解毒的功效，临床上常用于治疗                           附测定（ELISA）试剂盒（批号 E-EL-M3063）购自武汉伊
          高热、咽喉肿痛、黄疽、水肿、痛经、崩漏、带下、痔疮、毒                         莱瑞特生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，其余试剂均
                      [1]
          蛇咬伤等病症 。目前，研究者已从地菍中分离鉴定出                            为分析纯，水为超纯水。
          了170余种化合物，主要包括有机酸、脂肪酸、挥发油、黄                             20 批地菍药材（编号 S1～S20）采集于贵州、广东、
          酮以及鞣质类等成分，其中黄酮类化合物占地菍总化学                            广西、湖南、浙江等地，由贵州中医药大学药学院孙庆文
          成分的22%    [2―3] 。研究表明，地菍具有抗炎、抗氧化、抗肿                 教授鉴定均为野牡丹科植物地菍 M.dodecandrum Lour.
          瘤、止血、降血糖等药理作用            [4―5] ，但具体是其中哪些化           的全草，地菍药材来源信息见表1。
          学成分发挥治疗作用尚不明确。
                                                                          表1 地菍药材来源信息表
              中药谱效关系是在中药指纹图谱的基础上，将中药
                                                              编号 产地             采收日期   编号 产地             采收日期
          指纹图谱中化学成分的变化与中药药效结合起来，建立                            S1  贵州省黔南布依族苗族自治州 2020年7月  S11  湖南省永州市    2021年7月
         “谱-效”数学模型，筛选出与药效关系密切的特征峰，阐                           S2  贵州省黔南布依族苗族自治州 2020年7月  S12  广东省揭阳市    2021年7月
                                                              S3  贵州省黔东南苗族侗族自治州 2018年7月  S13  贵州省贵阳市    2022年7月
                                   [6]
          明中药发挥药效的物质基础 。本课题组前期研究发
                                                              S4  贵州省黔南布依族苗族自治州 2020年11月  S14  浙江省温州市   2022年7月
          现，地菍石油醚提取物具有一定抗炎作用，在此基础上，                           S5  贵州省黔南布依族苗族自治州 2020年11月  S15  广西壮族自治区玉林市  2022年7月
          笔者采用高效液相色谱（HPLC）法建立 20 批地菍石油                        S6  贵州省黔南布依族苗族自治州 2020年11月  S16  贵州省黔南布依族苗族自治州 2022年7月
          醚提取物指纹图谱，然后以脂多糖（lipopolysaccharide，                 S7  浙江省台州市温岭市     2021年7月  S17  贵州省贵阳市    2022年7月
                                                              S8  广西壮族自治区河池市    2021年7月  S18  广东省茂名市    2022年7月
          LPS）诱导RAW264.7细胞建立炎症模型，考察地菍石油                       S9  广西壮族自治区钦州市    2021年7月  S19  广西壮族自治区钦州市  2022年7月
          醚提取物对炎症指标一氧化氮（nitric oxide，NO）、肿瘤                   S10 广西壮族自治区玉林市    2021年7月  S20  福建省宁德市    2022年7月
          坏死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）的影响，进          1.3 细胞
          而采用灰色关联度法、偏最小二乘回归分析法研究其抗                                小鼠RAW264.7单核巨噬细胞（批号CL-0190）购自
          炎谱效关系，并结合分子对接技术验证其抗炎活性成
                                                              武汉普诺赛生命科技有限公司。
          分，从而为地菍石油醚提取物的抗炎活性物质基础研究                            2 方法与结果
          和应用提供参考。
                                                              2.1 地菍石油醚提取物HPLC指纹图谱的建立
          1 材料
                                                              2.1.1 色谱条件
          1.1 主要仪器
                                                                  采用 NanochromCore AQ C18 （ 250 mm ×4.6 mm，5
              本研究所用的主要仪器有 Essentia LC-16 型 HPLC
                                                              μm）色谱柱，以0.1%磷酸（A）-甲醇（B）为流动相进行梯
          仪（日本Shimadzu公司），FA2204N型万分之一分析天平
                                                              度 洗 脱（0～3  min，10%B；3～13  min，10%B→20%B；
         （上海菁海仪器有限公司），BB150 型 CO2培养箱、1530
                                                              13～20 min，20%B→25%B；20～30 min，25%B→30%B；
          型全波长酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），
                                                              30～40 min，30%B→35%B；40～50 min，35%B→45%B；
          CJV1500-Y型洁净工作台（山东新华医疗器械股份有限
                                                              50～70 min，45%B→70%B；70～85 min，70%B→80%B；
          公司），CKX53型倒置相差显微镜（上海蛮吉光电科技有
                                                              85～95 min，80%B→85%B；95～110 min，85%B→95%B；
          限公司）等。
          1.2 主要药品与试剂                                         110～115  min，95%B；115～120  min，95%B→100%B；
                                                              120～130 min，100%B）；流速为1 mL/min；柱温为35 ℃；
              没食子酸（批号 110831-201906，纯度 91.5%）、原儿
                                                              检测波长为260 nm；进样体积为10 μL。
          茶酸（批号 110809-201906，纯度 97.7%）、牡荆素（批号
                                                              2.1.2 供试品溶液的制备
          111687-201704，纯 度 94.9%）、鞣 花 酸（批 号 111959-
                                                                  取地菍药材粗粉 0.15 kg，加入 14 倍量的 95% 乙醇
          201903，纯度88.85%）、山柰素（批号110861-202013，纯度
          93.2%）、木犀草素（批号111520-202006，纯度94.9%）、槲              水浴回流2次，每次1 h；合并滤液，浓缩成浸膏（9.83 g）。
          皮素（批号 100081-201610，纯度 99.1%）、阿魏酸（批号                浸膏加水混悬，用石油醚萃取至无色，所得萃取液减压
          110773-201915，纯度 99.4%）对照品均购自中国食品药                  浓缩，水浴挥干溶剂，即得地菍石油醚提取物（得率为
          品检定研究院；异牡荆素对照品（批号C101499-201219，                    1.47%）。精密称取地菍石油醚提取物0.1 g，置于10 mL
          纯度98.0%）购自贵州迪大生物科技有限责任公司；LPS                        容量瓶中，加甲醇超声溶解后，用甲醇定容，采用 0.45
         （批号 93572-42-0）购自美国 Sigma 公司；DMEM 培养基                μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
         （批号 8122576）、青霉素-链霉素（批号 15140-122）均购                 2.1.3 混合对照品溶液的制备
          自美国 Gibco 公司；胎牛血清（批号 2148389）购自以色                       取原儿茶酸、阿魏酸、没食子酸、牡荆素、异牡荆素、
          列BI公司；二甲基亚砜（批号401Q037）购自北京索莱宝                       鞣花酸、槲皮素、木犀草素、山柰素对照品适量，置于同
          科技有限公司；CCK-8 试剂盒（批号 KA223173）购自上                    一容量瓶中，加甲醇制成各成分质量浓度分别为 4.60、


          · 2878 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 23                            中国药房  2024年第35卷第23期
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