Page 32 - 《中国药房》2024年22期

350 2.1.6 加样回收率试验
300 1
250 取同批次伸筋草（编号 S1）样品 9 份，每份约 0.3 g，
mAU 200 2 6 8
150
100 4 5 7 精密称定，按已知各成分含量的 80%、100%、120% 加入
50 3 混合对照品溶液，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 每个比例制备3份，再按“2.1.3”项下色谱条件进样测定。
t/min
A.混合对照品溶液
350 结果显示，α-玉柏碱、β-玉柏碱、石松碱、石松灵碱、伸筋
300 1
250 草萜宁醇、21-表千层塔烯二醇、豆甾醇和β-谷甾醇的平
mAU 200 2 5 7 均 加 样 回 收 率 分 别 为 100.07%、99.30%、97.42%、
150
100 6 8
50 3 4 97.86%、98.77%、99.14%、96.91%和99.46%，RSD分别为
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0.76%、1.39%、1.48%、1.76%、1.37%、1.24%、1.42%和1.18%
t/min
B.供试品溶液（编号S1） （n＝9）。
1：α-玉柏碱；2：β-玉柏碱；3：石松碱；4：石松灵碱；5：伸筋草萜宁 2.1.7 相对校正因子计算
醇；6：21-表千层塔烯二醇；7：豆甾醇；8：β-谷甾醇。
图1 混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图 取“2.1.4”项下6个质量浓度梯度的混合对照品溶液
各10 µL，按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，以伸筋草萜
宁醇、21-表千层塔烯二醇、豆甾醇和β-谷甾醇的峰面积。
c s×A i
以峰面积为纵坐标（y）、质量浓度为横坐标（x）进行线性 宁醇为内参物，计算相对校正因子（ƒ）：ƒ＝ 。式
c i×A s
回归，结果见表2。
中 cs和 ci分别代表待测成分和内参物的质量浓度，As和
表2 8个成分的线性关系考察结果
Ai分别代表待测成分和内参物的峰面积，取 6 个浓度的
不同梯度的质量浓度/（µg/mL） 线性范围/
成分 回归方程 r
1 2 3 4 5 6 （µg/mL） 平均ƒ值作为定量的ƒ值 [8―9] 。结果见表3。
α-玉柏碱 1.55 3.10 7.75 15.50 31.00 38.75 y＝1.034 3×10 x－351.4 1.55～38.75 0.999 6
6
5
β-玉柏碱 0.83 1.66 4.15 8.30 16.60 20.75 y＝9.622 5×10 x+1 055.2 0.83～20.75 0.999 1 表3 不同混合对照品溶液ƒ值的测定结果
5
石松碱 0.09 0.18 0.45 0.90 1.80 2.25 y＝4.067 0×10 x+235.7 0.09～2.25 0.999 5 序号 α-玉柏碱 β-玉柏碱 石松碱 石松灵碱 21-表千层塔烯二醇 豆甾醇 β-谷甾醇
石松灵碱 0.12 0.24 0.60 1.20 2.40 3.00 y＝5.266 5×10 x－446.1 0.12～3.00 0.999 7 1 0.587 4 0.616 6 1.456 2 1.158 0 0.766 1 0.833 1 0.665 7
5
伸筋草萜宁醇 0.48 0.96 2.40 4.80 9.60 12.00 y＝5.997 0×10 x+1 529.7 0.48～12.00 0.999 4 2 0.584 4 0.614 3 1.467 1 1.168 5 0.766 3 0.831 6 0.688 4
5
21-表千层塔烯二醇 0.65 1.30 3.25 6.50 13.00 16.25 y＝7.898 8×10 x－282.9 0.65～16.25 0.999 2
5
3 0.590 2 0.645 5 1.491 1 1.172 9 0.778 1 0.833 3 0.686 9
豆甾醇 0.26 0.52 1.30 2.60 5.20 6.50 y＝7.439 8×10 x－2 332.5 0.26～6.50 0.999 7
5
β-谷甾醇 0.74 1.48 3.70 7.40 14.80 18.50 y＝8.916 8×10 x+1 361.9 0.74～18.50 0.999 1 4 0.585 3 0.620 7 1.474 1 1.157 1 0.757 1 0.826 8 0.667 2
5
5 0.573 5 0.623 9 1.449 9 1.131 2 0.759 2 0.807 9 0.662 0
2.1.5 精密度、稳定性与重复性试验
6 0.583 9 0.623 7 1.486 2 1.147 3 0.762 2 0.809 1 0.681 2
（1）精密度试验：按“2.1.2”项下方法制备供试品溶 平均值 0.584 1 0.624 1 1.470 8 1.155 8 0.764 8 0.823 6 0.675 2
液（编号 S1），再按“2.1.3”项下色谱条件进样测定 6 次， RSD/% 0.97 1.79 1.11 1.31 0.98 1.45 1.72
结果显示，α-玉柏碱、β-玉柏碱、石松碱、石松灵碱、伸筋 2.1.8 ƒ值的耐用性考察
草萜宁醇、21-表千层塔烯二醇、豆甾醇和β-谷甾醇峰面
考察不同仪器及色谱柱、流速、柱温对 ƒ 值的影响。
积的 RSD 分别为 0.84%、1.05%、1.64%、1.59%、0.62%、
仪器包括 Waters e2695 型和 Primaide 1430 型，色谱柱包
1.28%、1.43% 和 1.11%（n＝6），表明方法精密度良好；
括 Nucleosil C18、Jupiter 300 C18、Discovery HS C18，流速
（2）稳定性试验：按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液（编
包括 0.8、1.0、1.2 mL/min，柱温包括 25、30、35 ℃。取
号S1），室温放置0、2、4、8、12、18、24 h时进样测定，结果
“2.1.1”项下混合对照品溶液进样测定，结果显示，使用
显示，上述8个成分峰面积的RSD分别为1.18%、1.25%、
不同仪器和不同色谱柱时，α-玉柏碱、β-玉柏碱、石松碱、
1.91%、1.72%、0.74%、1.37%、1.51% 和 1.29%（n＝7），表
石松灵碱、21-表千层塔烯二醇、豆甾醇和β-谷甾醇的平
明供试品溶液在室温下放置 24 h 稳定性良好；（3）重复
均 ƒ 值分别为 0.583 7、0.629 1、1.472 7、1.159 2、0.768 2、
性试验：取同批次伸筋草（编号 S1）样品 6 份，分别按
“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，记录峰面 0.822 6、0.674 4；不同流速下，上述成分的平均 ƒ 值分别
积，采用外标法（external standard method，ESM）计算上 为 0.583 0、0.625 3、1.469 1、1.152 1、0.766 3、0.821 5、
述8个成分的含量，结果显示，上述8个成分含量的RSD 0.675 6；不同柱温下，上述成分的平均ƒ值分别为0.584 7、
分 别 为 1.28%、1.31%、1.82%、1.75%、0.95%、1.49%、 0.627 5、1.471 3、1.155 3、0.766 6、0.824 1、0.675 9，上述
1.64%和1.37%（n＝6），表明方法重复性良好。 RSD均小于2.0%。

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