Page 20 - 《中国药房》2024年22期
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已成为治疗NSCLC的一线化疗药物              [7―8] 。该药能促进微        1.3 细胞
          管蛋白聚合并阻止微管蛋白解聚，抑制微管网动力学重                                小鼠Lewis肺癌细胞LLC（编号BNCC338433）购自
          组，影响有丝分裂进程，使细胞阻滞于 G2/M 期，从而诱                        商城北纳创联生物科技有限公司。
          导肿瘤细胞凋亡       [9―10] 。然而，PTX存在水溶性差、生物利              2 方法与结果
          用率低、不良反应较明显等问题，故有必要进行剂型优                            2.1 PTX-PLGA-NPs的制备
                                                                  本 实 验 采 用 乳 化 溶 剂 挥 发 法 制 备 PTX-PLGA-
          化 。研究指出，将难溶性药物制备成纳米制剂，不仅
            [11]
                                                              NPs ：分别称取PTX对照品2 mg、PLGA 10 mg（两者质
                                                                 [15]
          可以解决水溶性差的问题，而且可以提高其生物利用
                                                              量比1∶5），置于10 mL EP管中，滴加二氯甲烷1 g，超声
            [12]
          度 。聚乳酸-羟基乙酸共聚物（polylactic-co-glycolic
                                                              2 min；待药物、PLGA 溶解、混匀后，加入 1%PVA 溶液 5
          acid，PLGA）具有良好的生物可降解性和组织相容性、优
                                                              mL，于冰浴中超声 10 min（超声 2 s、停 2 s，功率 200 W）
          良的成球性能和降解速率，是美国FDA认证的安全药用
                                                              使其乳化；乳化后，于 40 ℃下以 30 r/min 减压旋转挥发
          辅料  [13―14] 。基于上述背景，本研究以PLGA为载体，制备
                                                              有机溶剂，即得PTX-PLGA-NPs。
          包载PTX的纳米粒（简称“PTX-PLGA-NPs”），并考察其                    2.2 PTX-PLGA-NPs的表征
          理化性质及对 Lewis 肺癌细胞的体外抑制作用，以期为                        2.2.1 粒径、多分散性指数及Zeta电位测定
          相关制剂的研发和临床应用提供参考。                                       取“2.1”项下所制 PTX-PLGA-NPs 50 μL，用水稀释
          1 材料                                                至 1 mL，采用激光粒度仪测定其粒径、多分散性指数
          1.1 主要仪器                                           （polydispersity index，PDI）和 Zeta 电位。结果（图 1）显
              本研究所用主要仪器包括 LC-20AT 型高效液相色                      示，PTX-PLGA-NPs 的平均粒径为（172.03±0.95）nm，
                                                              PDI 为 0.098±0.012，Zeta 电位为（－1.76±0.02）mV，表
          谱（HPLC）仪（日本Shimadzu公司）、SCIENTZ-ⅡD型超
                                                              明所得纳米粒制剂粒径均一、分散均匀，呈负电性。
          声波细胞粉碎仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）、
                                                                     20
          ZEN-3600 型激光粒度仪（英国 Malvern 公司）、JEM-
                                                                     15
          F200 型透射电子显微镜（日本 JEOL 公司）、756PC 型紫                         强度/%  10
          外-可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公                                     5
          司）、Countstar Rigel S2 型全自动细胞荧光分析仪（上海                        0
                                                                          1                         10                     100                   1 000               10 000
          睿钰生物科技有限公司）、FACSCantoⅡ型流式细胞仪                                                  粒径/nm
                                                                                        A.粒径
         （美国 BD 公司）、SpectraMax i3x 型多功能酶标仪[美谷                      500 000
                                                                   400 000
          分子仪器（上海）有限公司]、TCSSP8型激光共聚焦显微                            总数  300 000
          镜（德国Leica公司）、BSA224S型电子分析天平[赛多利                          200 000
                                                                   100 000
          斯科学仪器（北京）有限公司]等。
                                                                     －200                  －100                           0                               100                          200
          1.2 主要药品与试剂                                                               Zeta电位/mV
                                                                                    B.Zeta电位
              PTX 对照品（批号 J04S11H123510，纯度≥98%）、
                                                                图1 PTX-PLGA-NPs的粒径和Zeta电位分布图
          PLGA（乳酸-羟基乙酸质量比50∶50，批号F24IS207986）
                                                              2.2.2 微观形态学考察
          均购自上海源叶生物科技有限公司；聚乙烯醇[poly
                                                                  取“2.1”项下所制 PTX-PLGA-NPs 适量，用水稀释
         （vinyl alcohol），PVA；批号 C16051871]购自上海麦克林
                                                              10倍后，取混悬液1滴置于400目的碳膜铜网上，经干燥
          生化科技有限公司；RPMI 1640 培养基、青霉素-链霉素
                                                              后，用2%磷钨酸钠染色，通过透射电子显微镜观察其微
          双抗（含 100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）均购自
                                                              观形态。结果（图2）显示，PTX-PLGA-NPs呈类球形。
          美国 Gibco 公司；胎牛血清（FBS）购自美国 Sigma 公司；
          0.25%胰蛋白酶（含0.02%乙二胺四乙酸）购自苏州新赛
          美生物科技有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS）购自北京索
          莱宝科技有限公司；Annexin Ⅴ-FITC/PI 双染细胞凋亡
          试 剂 盒（批 号 556547）、PI/RNase 染 色 缓 冲 液（批 号
          550825）均 购 自 美 国 BD 公 司 ；CCK-8 试 剂（批 号
          20230609）、Calcein-AM/PI 染色试剂盒（批号 BN14041）
          购自北京百瑞极生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，二
          甲基亚砜（DMSO）、甲醇、二氯甲烷等均为分析纯，水为
          纯净水。                                                   图2 PTX-PLGA-NPs的透射电子显微镜观察图


          · 2722 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 22                            中国药房  2024年第35卷第22期
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