Page 60 - 《中国药房》2024年21期
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早产是指妊娠不足 37 周的分娩。引起早产的高危                        隆 抗 体（批 号 分 别 为 ab263899、ab207802、ab194528、
          因素较多，其中感染是导致早产的重要原因之一                       [1―2] 。  ab32518、ab288751、ab8245）购自英国 Abcam 公司；辣根
          感染性早产会导致早产儿发生神经发育迟缓、行为缺陷                            过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（批号WG-701N）购自南
          等妊娠并发症，且早产儿死亡率较高，存活的早产儿中                            京微测生物科技有限公司。
          也有部分会出现神经系统损伤，严重影响早产儿未来的                            1.3 实验动物
          生活质量 。因此，开发干预感染性早产的药物具有重                                本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，9～10 周龄，雌
                  [3]
          要意义。                                                鼠体重249～267 g，雄鼠体重358～386 g，均购自广东省
              大黄素主要从中药大黄的根茎中提取，具有抗肿                           医学实验动物中心，动物生产许可证号为 SCXK（粤）
                                       [4]
          瘤、抗菌、抗氧化、抗炎等药理作用 。相关研究发现，大                          2022-0002。大鼠饲养在温度 23～25 ℃、湿度 45%～
          黄素可减少大鼠子宫内炎症的产生，改善大鼠神经功                             55%、12 h光照/12 h黑暗的环境中。本实验于广州医科
                          [5]
          能，并减轻脑损伤 。但大黄素是否可改善感染性早产                            大学实验动物中心[动物使用许可证号为 SYXK（粤）
          尚不明确。核因子 κB（nuclear transcription factor-κB，        2023-0227]进行，且已获得广州医科大学附属第三医院
          NF-κB）抑制蛋白激酶（inhibitory protein kinase，IKK）/        伦理委员会的批准，审批号为附三院2023（84）号。
          NF-κB 抑制蛋白（NF-κB inhibitory protein，IκB）/NF-κB      2 方法
          信号通路是免疫系统信号传导的组成部分 。研究发                             2.1 感染性早产大鼠建模及分组给药
                                                [6]
          现，沉默 IKK/IκB/NF-κB 信号通路可以抑制脂多糖                          参考相关文献方法，构建感染性早产大鼠模型 ：将
                                                                                                         [9]
         （lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠星形胶质细胞炎症，               50只雄性大鼠和100只雌性大鼠合笼饲养，每天观察雌
                                           [7]
          改善支气管哮喘大鼠氧化应激和炎症 。有研究报道，                            鼠阴栓形成情况，若阴道涂片镜检有阴栓则表示受孕成
          LPS诱导的感染性早产小鼠胎盘组织中IKK/IκB/NF-κB                     功（即妊娠第0天）。选取14只受孕雌鼠作为对照组（于
                         [8]
          信号通路被激活 。由此推测，抑制 IKK/IκB/NF-κB 信                    妊娠第7天腹腔注射生理盐水）。将其余受孕雌鼠于妊
          号通路活性，可能会改善感染性早产。基于此，本研究                            娠第7天腹腔注射400 μg/kg LPS，若24 h内出现阴道流
          基于IKK/IκB/NF-κB信号通路，探讨大黄素对感染性早                      血则表明感染性早产大鼠造模成功 。经观察，符合造
                                                                                            [10]
          产大鼠子宫平滑肌收缩、炎症和氧化应激的影响，以期                            模成功标准的雌性大鼠有56只。
          为临床治疗感染性早产提供实验基础。                                       将造模成功的大鼠随机分成模型组、大黄素组、IKK
          1 材料                                                激活组、大黄素+IKK激活组，每组14只。大黄素组大鼠
                                                                                [10]
          1.1 主要仪器                                            灌胃 60 mg/kg 大黄素 （临用时以生理盐水配制）；IKK
              多道生理信号采集系统（型号 RM6280C）、酶标仪                      激活组大鼠尾静脉注射 2 μg pcDNA3.1-IKK 重组质粒
         （型号FlexB-500）购自北京众实迪创科技发展有限责任                       （质粒浓度为2 μg/mL，注射体积为1 mL，根据试剂盒说
          公司；显微镜（型号 IXplore SpinSR）、蛋白凝胶成像仪                   明书设置给药剂量）；大黄素+IKK 激活组大鼠灌胃 60
         （型号 ChampChemi800）购自嘉兴市艾科诺生物科技有                      mg/kg 大黄素，同时尾静脉注射 2 μg pcDNA3.1-IKK 重
          限公司。                                                组质粒；对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。每
          1.2 主要药品与试剂                                         天给药 1 次，连续 7 d。末次给药 24 h 后进行后续检测，
              大黄素（批号 A1918，原料药，纯度≥99.25%）、LPS                 所有雌性大鼠均是在妊娠第15天结束妊娠，妊娠天数少
         （批号 A2017）购自北京康瑞纳生物科技有限公司；                           于正常妊娠期（19～21 d），故所有雌性大鼠均属于早产
          pcDNA3.1-IKK重组质粒（批号QSP4362）购自温州科淼                   且怀孕周期一致。
          生物科技有限公司；白细胞介素1β（interleukin，IL-1β）、                2.2 样本采集及子宫肌条肌张力的测定
          IL-6、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、           末次给药 24 h 后，以戊巴比妥钠（45 mg/kg）麻醉大
          超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛               鼠，于腹主动脉采血3 mL，以4 400 r/min离心15 min，取
         （malondialdehyde，MDA）、过氧化氢酶（catalase，CAT）酶           上层血清，置于－70 ℃冰箱中保存。随后将大鼠断头处
          联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，          死，分离子宫组织，剪取10 mm长的子宫肌条，以生理盐
          ELISA）试 剂 盒（批 号 分 别 为 K1052-103、K1024-117、          水反复冲洗后，将其一端与多道生理信号采集系统相
          K1019-141、K1035-182、K1007-104、K1044-101）购自武         连，另一端与张力转换器相连，记录子宫肌条肌张力。
          汉艾美捷科技有限公司；苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，                其余子宫组织一部分浸泡在4%多聚甲醛中用于病理检
          HE）染色试剂（批号MM1013）购自上海懋康生物科技有                        测，一部分保存在－70 ℃冰箱中备检。
          限公司；兔源NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor pro‐              2.3 大鼠血清中炎症和氧化应激指标水平检测
          tein 3，NLRP3）、剪切型胱天蛋白酶 1（cleaved-caspase-               取“2.2”项下大鼠血清样本，低温融化后，按照
          1）、IKK、IκB、NF-κB p65、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（gly-               ELISA试剂盒说明书方法检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-
          ceraldehyde-3-phosphate  dehydrogenase，GAPDH）单 克    α、SOD、MDA、CAT水平。


          · 2630 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 21                            中国药房  2024年第35卷第21期
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