Page 65 - 《中国药房》2024年21期
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inflammatory  response，  oxidative  stress，  and  hippocampal  tissue  damage  in  IS  rats，  and  promote  neurological  function.  Its
          mechanism of action may be related to the activation of Nrg-1/ErbB4 signaling pathway.
          KEYWORDS    andrographolide； ischemic stroke； Nrg-1/ErbB4 signaling pathway； neuronal apoptosis； neurological function



              缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）是一种血管堵塞              R20172，天津越腾生物技术有限公司），丙二醛（malonal‐
          或动脉狭窄引起的脑血管疾病。轻度 IS 患者会出现神                         dehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，
          经功能障碍，失去自理能力，影响正常生活，给家庭带来                          SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）、TUNEL 试剂盒和
                                     [1]
          巨大负担；重度IS患者可能死亡 。目前IS的发病机制                         TTC 染液（批号分别为 A003-1-2、A001-1-2、A007-2-1、
          尚不完全清楚，但有研究显示与炎症、神经元凋亡、氧化                          G002-2-2、D025-1-1，南京建成生物工程研究所），基质金
                    [2]
          应激等有关 。目前临床治疗IS的主要措施是静脉溶栓                          属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、剪切型
          和手术取栓再辅以药物进行治疗，但风险较大，效果较                           胱天蛋白酶 3（cleaved-caspase-3）、Nrg-1、ErbB4、磷酸化
          差 。因此，探究IS的发生机制，开发新的药物对治疗IS                       （p-ErbB4）、β-肌动蛋白（β-actin）一抗及辣根过氧化酶
            [3]
          具有重要意义。                                           （HRP）标记的免疫球蛋白 G（IgG）二抗（批号分别为
              穿心莲内酯（andrographolide，Andro）是植物穿心莲             ab58803、ab214430、ab191139、ab19391、ab1109273、
          的活性成分，临床用于抗病毒、抗菌、抗炎、抗肿瘤、治疗                         ab179467、ab302644，英国Abcam公司）。
          心脑血管疾病等，目前临床上常见的含Andro的口服药                         1.3 动物
          品有穿心莲内酯胶囊、穿心莲内酯分散片、穿心莲内酯                               本研究所用动物为 SPF 级 SD 雄性大鼠，共 80 只，
          滴丸，注射用药品有莲必治注射液、炎琥宁注射液、穿琥                          6～7 周龄，体重 190～210 g，购自湖北贝恩特生物科技
                    [4]
          宁注射剂等 。有研究表明，Andro可减轻缺血再灌注损                        有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（鄂）2021-0027。
                                                [5]
          伤小鼠的炎症和神经损伤，促进神经元增殖 。另有研                           动物在实验室[环境温度（22±2） ℃、相对湿度（60±
          究表明，Andro 可减轻慢性脑缺血大鼠的炎症和神经损                        5）%、12 h光/12 h暗循环]适应性饲养7 d，饲养期间自由
                                 [6]
          伤，改善其学习和记忆功能 。由此可见，Andro 可降低                       摄食和饮水。本实验在湖北贝恩特生物科技有限公司
          炎症、减轻脑缺血神经损伤、改善神经功能，但其具体作                          进行，并已通过该公司动物伦理委员会审核批准（批件
          用机制尚不明确。研究显示，神经调节蛋白1（regulating                    号为2023-12158）。
          the neuregulin-1，Nrg-1）/表皮生长因子受体 4（epithelial      2 方法
          growth factor receptor 4，ErbB4）信号通路在神经发育和          2.1 造模、分组与给药
          细胞增殖、分化等过程中发挥着重要作用，激活 Nrg-1/                           选取 65 只大鼠建立 IS 模型。将大鼠麻醉并固定，
                                               [7]
          ErbB4信号通路可减少癫痫小鼠神经元死亡 。基于此，                        在颈部剃毛消毒后切开一个口，分离左侧颈总动脉、颈
          本研究通过建立IS大鼠模型，探讨Andro是否可通过调节                       内动脉和颈外动脉，将颈总动脉和颈外动脉近心端结
          Nrg-1/ErbB4 信号通路来降低 IS 大鼠神经元凋亡，进而                  扎，夹闭颈内动脉，将线栓插入颈总动脉延伸直至进入
          改善神经损伤，为Andro的临床应用提供参考。                            颈内动脉，然后结扎左侧大脑中动脉，缺血 2 h；取出线
          1 材料                                               栓恢复供血，缝合伤口并消毒 。术后 24 h 采用 Zea-
                                                                                        [8]
                                                                                                           [8]
          1.1 主要仪器                                           Longa 法对大鼠进行评分，得分 1～3 分为造模成功 。
              GX53 型显微镜购自上海巴贯仪器科技有限公司；                       造模成功的大鼠共61只，将其中60只大鼠（去掉评分最
          YP-96A 型酶标仪购自山东优云谱光电科技有限公司；                        低的 1 只）随机分为模型组（Model 组）、Andro 低剂量组
          SYD-K4080A 型组织切片机购自沈阳誉德电子仪器有                      （Andro-L 组）、Andro 高剂量组（Andro-H 组）和 Andro-
          限公司；WTY-31 型荧光显微镜购自深圳微特视界科技                        H+Dacomitinib 组 ，每 组 15 只 。 另 取 15 只 大 鼠 作 为
          有限公司；UV-6100S 型紫外分光光度计购自江苏盛奥                       Sham组，仅切开颈部皮肤后就缝合伤口并消毒。
          华环保科技有限公司。                                             造模 24 h 后，Andro-L 组、Andro-H 组大鼠分别灌胃
                                                                                 [5]
          1.2 主要药品与试剂                                        50、100 mg/kg 的 Andro ，Andro-H+Dacomitinib 组大鼠
                                                                                                           [9]
              本研究所用的主要药品与试剂有：Andro对照品（纯                      灌胃 100 mg/kg 的 Andro 和 7.5 mg/kg 的 Dacomitinib ，
          度＞99%，批号 DC0036，成都乐美天医药科技有限公                       Sham 组和 Model 组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天 1
          司），Nrg-1/ErbB4 信号通路抑制剂 Dacomitinib 标准品             次，连续7 d。
         （纯度＞99.6%，批号HY-13272，美国MCE公司），乳酸脱                   2.2 大鼠神经功能评估
                                                                                                 [8]
          氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肿瘤坏死因子 α（tu‐             给药结束后 24 h 进行 Zea-Longa 评分 ：0 分——无
          mor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素 1β（interleu‐    异常；1 分——提尾时左侧前肢弯曲；2 分——行走时追
          kin-1β，IL-1β）、IL-10、神经生长因子（nerve growth fac‐       尾或向左侧划圈；3 分——行走时向左侧倾倒；4 分——
          tor，NGF）酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒（批号分别                    完全不能行走。
          为YT-H11299、YT-R20639、YT-R20828、YT-R20039、YT-           Zea-Longa评分后进行Morris水迷宫实验：制作1个


          中国药房  2024年第35卷第21期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 21    · 2635 ·
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