Page 47 - 《中国药房》2024年21期
P. 47

随着广谱抗菌药的广泛使用，细菌耐药率呈逐年升                         1.2 主要药品与试剂
          高 的 趋 势 ，出 现 了 耐 甲 氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌                 LF原料药（批号220601）购于西安天一生物技术股
         （methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）等多  份有限公司；VAN（批号 EZ78908353，纯度≥93%）购于
          药 耐 药 菌 株 ，给 临 床 抗 感 染 治 疗 带 来 巨 大 挑 战 。           德国 BioFroxx 公司；大豆磷脂（批号 SY-SO-220602）购
                                                       [1]
          MRSA在全球广泛流行，已成为菌血症、心内膜炎、皮肤                         于艾伟拓（上海）医药科技有限公司；胆固醇（批号
          和软组织感染、骨和关节感染以及医院获得性感染的主                           9328010130）购于北京鼎国昌盛生物技术有限责任公
                [2]
          要原因 。目前，临床上治疗 MRSA 感染的首选药物是                        司；聚乙烯醇（polyvinyl alcohol，PVA）、壳聚糖（chitosan，
          万古霉素（vancomycin，VAN），其次还有利奈唑胺和达                    CS）、甘 油（ 批 号 分 别 为 H2117244、B2218417、
          托霉素，然而近年来发现 VAN 对 MRSA 的最小抑菌浓                      E2205022）购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司；木
          度出现向上漂移的现象，并且还发现了对上述抗菌药耐                           犀草苷（批号 ZLX8-JDTW，纯度≥98%）购于中国食品
                    [3]
          药的分离株 。因此，积极探寻新的抗 MRSA 药物具有                        药品检定研究院；磷酸盐缓冲液（PBS）购于上海碧云天
          重要意义。                                              生物技术股份有限公司；水解酪蛋白（Mueller-Hinton，
              金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的                          MH）肉汤、MH 琼脂（批号分别为 20221018、20220914）
          花，中医理论认为其具有清热解毒、宣风散热的功效，是                          购于青岛海博生物技术有限公司；细菌活力检测试剂盒
          治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、温病发热之要                          （批号 2663842）购于美国 Invitrogen 公司；结晶紫染液
            [4]
          药 。现代药理研究表明，金银花具有抗菌、抗病毒、抗                         （批号 2305001）购于北京索莱宝科技有限公司；钾离子
                                                                                       2+
                                      [5]
          氧化、抗炎、调节免疫等多种活性 。研究显示，金银花                         （K ）测定试剂盒、镁离子（Mg ）测定试剂盒、乳酸脱氢
                                                                +
          含有挥发油类、有机酸类、黄酮类、三萜及其皂苷类等活                          酶（lactic dehydrogenase，LDH）测定试剂盒、碱性磷酸酶
          性物质，其中绿原酸和黄酮类化合物是其主要的抗菌活                          （alkaline phosphatase，AKP）测定试剂盒（批号分别为
          性成分，且黄酮类化合物的抗菌作用比绿原酸更强                     [5―6] 。  20230113、20230213、20230208、20230208）均购于南京
          由此可知，金银花黄酮（Lonicerae Japonicae Flos flavo‐         建成生物工程研究所有限公司；总RNA提取试剂盒、逆
          noids，LF）有望被开发成抗MRSA相关制剂。                          转 录 试 剂 盒 、PCR 试 剂 盒（批 号 分 别 为 7F762E3、
              脂质体作为一种新型药物递送系统，对亲水和亲脂                         7E782J3、7E12G3）购于南京诺唯赞生物科技股份有限
          药物均有良好的包载能力，并能提高药物的稳定性，还                           公司；PCR引物由通用生物（安徽）股份有限公司合成。
                              [7]
          具有良好的生物相容性 。然而，液体状态的脂质体具                           1.3 菌株
          有易聚集合并、泄漏药物等缺点 。膜剂作为一种具有                               MRSA 菌株（ATCC43300）购于重庆恩诺医疗设备
                                     [8]
          良好生物相容性和黏附性的固体制剂，特别适用于皮肤                           有限公司。
          给药，将脂质体负载于膜剂可有效改善上述缺点。由于                           2 方法
          MRSA是皮肤和软组织感染的重要病原体，本研究拟将                          2.1 LFLM的制备及表征
          LF制成脂质体膜（LF liposome membrane，LFLM），并探                 采用乙醇注入法制备LF脂质体 。称取900 mg LF
                                                                                            [8]
          究其对MRSA的抗菌作用及机制，以期为皮肤和软组织                          溶于30 mL纯水中，置于磁力搅拌器上预热至40 ℃。称
          的 MRSA 感染提供新的治疗策略，同时为 LF 的进一步                      取适量大豆磷脂和胆固醇（质量比为15∶1）溶于5 mL无
          开发利用奠定基础。                                          水乙醇中，使大豆磷脂质量浓度为 35 mg/mL。设置搅
          1 材料                                               拌转速为500 r/min，用注射器缓慢将含大豆磷脂和胆固
          1.1 主要仪器                                           醇的无水乙醇溶液注入 LF 溶液中，挥干乙醇后，超声

              本研究所用主要仪器有 Zetasizer Nano ZS-90 型激            （功率200 W，频率20 kHz）10 min即得LF脂质体。平行
          光粒度仪（英国Malvern公司），Allegra X-30R 型低温离               制备3批LF脂质体，利用激光粒度仪测定其粒径和多分
          心机（美国 Beckman 公司），LC-M20A 型高效液相色                   散性指数（polydispersity index，PDI）。
                                                                                            [9]
          谱（HPLC）仪（日本 Shimadzu 公司），DM4B 型荧光显                     参考文献方法并适当改进膜材 ：称取2.5 g PVA溶
          微镜及成像系统（德国Leica公司），Synergy型多功能酶                    于 50 mL 90 ℃热水中，冷却至室温后加入 0.5 mL 冰醋
          标仪（美国BioTek公司），CFX96型荧光定量聚合酶链式                     酸和 0.5 g CS 混匀，形成 PVA-CS 溶液，作为成膜材料。
          反应（PCR）仪（美国 Bio-Rad 公司），JY2002 型电子天平               将 LF 脂质体、PVA-CS 溶液和甘油按体积比 5∶4∶1 混匀
         （上海衡平仪器仪表有限公司）。                                     后，铺于平整的玻璃板上，烘干即得LFLM。通过观察膜


          中国药房  2024年第35卷第21期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 21    · 2617 ·
   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52