Page 49 - 《中国药房》2024年17期
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TG， FFA， AST， ALT， PCⅢ， Ⅳ-Col， LN， TGF-β1， IL-1β， iNOS and IL-6， and protein expressions of Ⅰ-Col， Ⅳ-Col， SphK1
          and  S1P  in  liver  tissue  were  greatly  increased （P＜0.05）.  Compared  with  the  model  group，  the  liver  tissue  pathological  damage
          symptoms  of  rats  in  asperuloside  low-dose  and  high-dose  groups  were  improved，  and  the  above  indexes  were  all  reduced
          significantly （P＜0.05）； moreover， the high-dose group had a better effect （P＜0.05）. Compared to asperuloside high-dose group，
          high dose of asperuloside+pc-NC group， the pathological damage of liver tissue symptoms in rats were aggravated in high dose of
          asperuloside+pc-SphK1  group，  and  the  above  indexes  were  all  increased  significantly （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Asperuloside
          can reduce the expressions of pro-fibrotic factor， pro-inflammatory factors and collagen formation-related proteins by inhibiting the
          activity of SphK1/S1P signaling pathway， thus alleviating liver fibrosis in NAFLD rats.
          KEYWORDS    asperuloside； non-alcoholic fatty liver disease； liver fibrosis； SphK1/S1P signaling pathway


              非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver di-        1 材料
          sease，NAFLD）是一类非酒精因素引起的慢性肝病综合                      1.1 主要仪器
          征，以脂质代谢异常、肝实质细胞脂肪过多沉积、肝小叶                              BA-88A型生化分析仪购自上海聚慕医疗器械有限

          内炎症和纤维化为主要病理特征，若治疗不及时会逐渐                           公司；XSP-2CA型生物光学显微镜购自上海豫光仪器有
          发展为脂肪肝炎、肝纤维化、肝硬化，甚至是肝癌，是肝                          限公司；LD-4080 型病理冷冻切片机购自山东海卓尔光
          脏相关代谢性疾病死亡率增加的主要原因之一                    [1―3] 。脂   电科技有限公司；165-8033型垂直电泳及蛋白印迹套装
          质在肝细胞中的大量沉积触发细胞毒性，引发肝脏炎                            购自美国Bio-Rad公司。
          症，并导致肝脏纤维化与严重的功能损伤，是NAFLD发
                                                             1.2 主要药品与试剂
          生和发展的主要病理因素，因此改善 NAFLD 临床症状
                                                                 车叶草苷标准品（纯度≥95%，货号B24028）购自上
          的关键是抑制肝脏炎症与纤维化              [4―5] 。
                                                             海源叶生物科技有限公司；SphK1 过表达质粒（pc-
              鞘氨醇激酶 1（sphingosine kinase 1，SphK1）及其产
                                                             SphK1）与空载质粒（pc-NC）购自江苏赛索飞生物科技
          物 1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate，S1P）在器官
                                                             有限公司；兔源Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ，Ⅳ-Col）一
          发育、炎症、纤维化等生理病理过程中起到重要调控作
                                                             抗、苏木素-伊红（HE）染色试剂盒、辣根过氧化物酶标记
          用，其异常激活与肝脏疾病的发生关系密切。研究显
                                                             的免疫球蛋白 G（IgG）二抗、兔源Ⅰ型胶原（collagen
          示，抑制SphK1信号通路激活可抑制脂多糖诱导的肾小
                                                             type Ⅰ，Ⅰ-Col）一抗、兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyce-
                                [6]
          球系膜细胞增殖与纤维化 ；抑制 SphK1 诱导的内质网
                                                             raldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）一抗、兔
          应激可阻止肝星状细胞活化，进而减轻乙醇诱导的小鼠
                                                             源 SphK1 一抗、兔源 S1P 一抗、Masson 染色试剂盒以及
                         [7]
          肝 损 伤 和 纤 维 化 ；降 低 SphK1、S1P 的 表 达 可 减 轻
                                                             大鼠透明质酸（hyaluronic acid，HA）、转化生长因子 β1
          NAFLD 大鼠肝组织的脂肪沉积、氧化应激和炎症损伤
                                                            （transforming  growth  factor- β1，TGF- β1 ）、层 粘 连 蛋 白
              [8]
          症状 。由此可知，SphK1/S1P 信号通路可能是防治
          NAFLD的潜在作用靶点。                                     （laminin，LN）、白细胞介素1β（interlenkin-1β，IL-1β）、Ⅲ
                                                             型前胶原（procollagen type Ⅲ，PCⅢ）、诱导型一氧化氮
              车叶草苷是一种环烯醚萜类化合物，在杜仲科、茜
                                                             合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、IL-6、Ⅳ-Col
          草科等多种药用植物中广泛存在，具有减轻炎症、抑制
                                                             的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒均购自英国Abcam
          氧化应激、抗衰老等多种生物学活性，能通过降低促炎
          因子表达水平来改善毛果芸香碱诱导的癫痫发作症                             公司。
            [9]
          状 ，还可通过减少脂质积聚和改善线粒体功能而减轻                           1.3 实验动物
                            [11]
                  [10]
          肌肉衰老 。Shen 等 研究显示，车叶草苷可减轻高脂                            本研究所用动物为 SPF 级健康雄性 SD 大鼠，共 75
          饮食诱导的 NAFLD 小鼠肝细胞脂质沉积和炎症反应，                        只，体重210～245 g，鼠龄6～7周，购自武汉云克隆动物
          进而缓解其肝损伤症状，但车叶草苷是否可通过调节                            有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（鄂）2023-0021。
          SphK1/S1P信号通路来干预NAFLD，目前尚未明确。基                     所有大鼠于屏障环境下单笼饲养，相对湿度为 50%～
          于此，本文通过制备 NAFLD 大鼠模型，并基于 SphK1/                    60%，温度为 23～25 ℃，光照为明 12 h/暗 12 h。本研究
          S1P 信号通路探究车叶草苷对其肝纤维化的影响机制，                         方案已获得武汉华联科生物技术有限公司动物伦理委
          以期为车叶草苷在NAFLD临床治疗中的应用提供参考。                         员会审批（批件号为HLK-202325603）。


          中国药房  2024年第35卷第17期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 17    · 2103 ·
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