Page 44 - 《中国药房》2024年17期
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理盐水为溶剂，剂量参考文献[14]和预实验结果确定），                         3 结果
          每天 1 次，连续 14 d。Normal 组、CRS 组大鼠每天于同                 3.1 CTS对大鼠心功能指标的影响
          一时间灌胃与腹腔注射等体积的生理盐水。                                     与 Normal 组比较，CRS 组大鼠 LVEF、LVFS 均显著
          2.3 大鼠心功能检测                                         降低（P＜0.05），LVESD、LVEDD均显著升高（P＜0.05）。
              末次给药12 h后，行大鼠心脏超声检查。记录各组                        与 CRS 组比较，CTS-L 组、CTS-H 组大鼠上述指标均显
          大鼠的左室射血分数（left ventricular ejection fraction，       著 逆 转（P＜0.05），且 CTS-H 组 逆 转 效 果 更 好（P＜
          LVEF）、左室收缩末期内径（left ventricular end-systolic        0.05）。与 CTS-H 组比较，CTS-H+740Y-P 组大鼠 LVEF、
          diameter，LVESD）、左室舒张末期内径（left ventricular           LVFS 均显著降低（P＜0.05），LVESD、LVEDD 均显著升
          end-diastolic diameter，LVEDD）、左室短轴缩短率（left          高（P＜0.05）。结果见表1。
          ventricular fraction shortening，LVFS）。取 3 次心动周期
                                                              表1 各组大鼠 LVEF、LVESD、LVEDD、LVFS 的比较
          的各指标平均值作为每只大鼠的最终心功能参数。                                  （x±s，n＝12）
          2.4 大鼠肾功能指标检测                                       组别           LVEF/%   LVESD/mm  LVEDD/mm  LVFS/%
              末次给药后，将大鼠放入代谢笼中收集其 24 h 尿                       Normal组     82.47±7.23  2.62±0.49  3.18±0.52  45.38±4.97
          液。尿液离心后取上清液，按相应试剂盒说明书操作，                            CRS组        47.20±5.56 a  5.96±0.83 a  6.30±0.86 a  16.84±1.92 a
                                                              CTS-L组      62.35±6.94 b  3.86±0.70 b  4.74±0.93 b  28.79±3.13 b
          用酶标仪检测各组大鼠24 h尿蛋白水平。麻醉大鼠，于
                                                              CTS-H组      78.54±8.36 bc  2.75±0.43 bc  3.32±0.48 bc  41.46±4.86 bc
          心尖取血，将全血离心后取血清，按相应试剂盒说明书                            CTS-H+740Y-P组  59.77±6.59 d  3.93±0.60 d  5.04±0.67 d  25.76±3.31 d
          操作，以酶标仪检测各组大鼠血清BUN、Scr、BNP水平。                          a：与Normal组比较，P＜0.05；b：与CRS组比较，P＜0.05；c：与CTS-
          2.5 大鼠心脏与肾脏组织病理学变化观察                                L组比较，P＜0.05；d：与CTS-H组比较，P＜0.05。
              心尖取血后，各组大鼠脱颈椎处死，摘除肾脏、心                          3.2 CTS对大鼠肾功能的影响
          脏。每组选取6只大鼠的心脏、肾脏，生理盐水冲洗后置                               与 Normal 组比较，CRS 组大鼠 24 h 尿蛋白以及血
          于4%多聚甲醛中固定，再取部分进行常规的石蜡包埋、                           清 BUN、Scr、BNP 水平均显著升高（P＜0.05）。与 CRS
          切片和HE染色，并于光学显微镜下观察大鼠心脏、肾脏                           组比较，CTS-L 组、CTS-H 组大鼠上述指标均显著降低
          组织的病理学变化。                                          （P＜0.05），且 CTS-H 组较 CTS-L 组大鼠进一步降低
          2.6 大鼠心脏与肾脏组织纤维化观察                                 （P＜0.05）。与 CTS-H 组比较，CTS-H+740Y-P 组大鼠
              取“2.5”项下各组6只大鼠经固定的心脏、肾脏组织                       24 h 尿蛋白以及血清 BUN、Scr、BNP 水平均显著升高
          适量，进行常规的脱水、石蜡包埋、切片和Masson染色，                       （P＜0.05）。结果见表2。
          并于光镜下观察大鼠心脏、肾脏组织的纤维化情况，使                            表2 各组大鼠24 h尿蛋白以及血清BUN、Scr、BNP水
          用 Image Pro Plus 6.0 软件分析各组大鼠心脏与肾脏组                      平的比较（x±s，n＝12）
          织胶原染色面积[以心脏与肾脏组织阳性染色（蓝色）区                           组别         24 h尿蛋白/mg  BUN/（mmol/L）  Scr/（μmol/L）  BNP/（pg/mL）
          域面积占总面积的百分比表示]。                                     Normal组     3.21±0.86  2.49±0.73  36.28±3.92  104.56±9.35
                                                              CRS组        33.17±3.85 a  18.63±2.24 a  83.59±8.84 a  327.10±26.48 a
          2.7 大鼠心脏、肾脏组织中 PI3K/Akt/mTOR 信号通路
                                                              CTS-L组      21.48±2.39 b  12.54±1.63 b  55.62±6.17 b  223.69±20.57 b
          相关蛋白的表达检测                                           CTS-H组      6.39±0.92 bc  4.42±0.80 bc  40.49±4.55 bc  118.37±13.08 bc
              采用 Western blot 法检测。取每组另 6 只大鼠的心                CTS-H+740Y-P组  17.23±2.20 d  13.78±1.72 d  57.71±6.11 d  245.21±19.53 d
          脏、肾脏组织，碾碎，加入 RIPA 裂解液提取总蛋白。以                           a：与Normal组比较，P＜0.05；b：与CRS组比较，P＜0.05；c：与CTS-
                                                              L组比较，P＜0.05；d：与CTS-H组比较，P＜0.05。
          BCA 法测定蛋白浓度后，进行变性处理、电泳分离，转
          膜，5%BSA 封闭 2 h；加入 PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-           3.3 CTS对大鼠心肾组织病理学变化的影响
          Akt、p-mTOR、GAPDH 一抗（稀释比例均为 1∶1 000），                    Normal 组大鼠心肌细胞排列规整紧密、形态正常，
          4 ℃下孵育过夜；洗涤后，加入相应二抗（稀释比例为1∶                         细胞间无炎症细胞浸润和坏死区域；肾小管、肾小球的
          5 000），室温下孵育2 h；采用ECL进行显色，曝光，分析                     结构清晰，细胞排列整齐，无炎症细胞浸润。CRS 组大
          目标蛋白的灰度值，并以 p-PI3K 与 PI3K、p-Akt 与 Akt、              鼠心肌细胞形态肥大、排列紊乱，且出现大量炎症细胞
          p-mTOR 与 mTOR 的灰度值比值表示 PI3K、Akt、mTOR                浸润；肾小管结构紊乱、上皮细胞皱缩，肾小球体积增
          的磷酸化水平。                                             大，出现大量炎症细胞浸润。与CRS组比较，CTS-L组、
          2.8 统计学方法                                           CTS-H组大鼠的心肌细胞形态和排列有所恢复，肾脏组
              采用 GraphPad Prism 7.0 软件对数据进行统计分                织结构清晰，炎症细胞浸润均减轻，且 CTS-H 组大鼠的
          析。数据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分                          心肾组织病理状态恢复更为明显。与 CTS-H 组比较，
          析 ，进 一 步 两 两 比 较 采 用 LSD-t 检 验 。 检 验 水 准            CTS-H+740Y-P 组大鼠的心肾组织病理损伤加重，炎症
          α＝0.05。                                             细胞浸润增多。结果见图1。


          · 2098 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 17                            中国药房  2024年第35卷第17期
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