Page 38 - 《中国药房》2024年15期
P. 38

or down-regulated significantly （P＜0.05）. Compared with the model group， the pathological changes of infarcted myocardial tissue
          and  mitochondrial  swelling  had  been  improved；  the  levels  of  AMP  and  FFA，  and  the  protein  expressions  of  Bax  and  p62  in
          infarcted  myocardial  tissue  were  significantly  decreased  or  down-regulated  in  administration  groups，  while  the  level  of ATP，  and
          the  protein  expressions  of  Bcl-2  and  TBK1  were  increased  or  up-regulated  significantly （P＜0.05）.  And  the  effect  of  Qiangxin
          decoction+captopril group was better than that of single drug group. CONCLUSIONS Qiangxin decoction can alleviate myocardial
          fibrosis  and  mitochondrial  swelling  in  CHF  rats，  and  improve  their  myocardial  energy  metabolism，  which  may  be  related  to
          regulating the expression of Bcl-2， Bax， TBK1 and p62 proteins and promoting myocardial mitophagy.
          KEYWORDS     Qiangxin decoction； chronic heart failure； mitophagy； mitochondrial homeostasis； energy metabolism



              慢性心力衰竭（chronic cardiac failure，CHF）是心血          TS3S1型组织脱水机（浙江省金华市科迪仪器设备有限
          管疾病的终末阶段，其 1 年和 5 年病死率分别高达 20%                      公司）、HistoCore Arcadia 型石蜡包埋机（德国 Leica 公
          和53% 。据推算，目前我国CHF患者多达890万，且随                        司）、BX43 型显微镜（日本 Olympus 公司）、HT7800/
                [1]
          着人口老龄化加剧和危险人群增加，其患病率将进一步                            HT7700 型 透 射 电 镜（日 本 Hitachi 公 司）、Infinite
                                                                                                             ®
              [2]
          升高 。尽管现有 CHF 诊疗方案不断细化，新型药物和                         200PRO 型多功能酶标仪（瑞士 Tecan 公司）、PowerPac
                                                                                                      TM
          器械辅助治疗有益证据不断增多，但临床对CHF患者再                           Basic型电泳仪（美国Bio-Rad公司）、Chemi Doc  XRS+
          住院率和死亡率的控制仍难以达到预期                  [3―4] 。心脏为高      型超高灵敏度化学发光成像系统[伯乐生命医学产品
          能 量 消 耗 器 官 ，可 借 助 游 离 脂 肪 酸（free  fatty  acid，    （上海）有限公司]等。
          FFA）、葡萄糖、乳酸等物质代谢不断提供的腺苷三磷酸                          1.2 主要药品与试剂
         （adenosine triphosphate，ATP）来维持其基础代谢和收缩                  强心汤组方为炮附片（先煎）10 g，黄芪 30 g，党参
                                                    [5]
          功能，且这一过程与线粒体氧化磷酸化密切相关 。研                            15 g，桂枝、川芎、丹参、葶苈子、茯苓、白术各 10 g，柏子
          究证实，线粒体功能异常是心力衰竭的重要诱因之一，                            仁（打）12 g，炙甘草 6 g，玉竹 10 g。所有组方中药饮片
          心肌严重缺血缺氧可引起线粒体受损并产生大量活性                             均由广西中医药大学第一附属医院提供，经该院药学部
          氧（reactive oxygen species，ROS），从而导致心肌细胞死            杨正腾副主任药师鉴定均为真品。
          亡、成纤维细胞增殖和ATP供能减少，最终诱发CHF；而                             卡托普利片（阳性对照，批号220317，规格25 mg）购
          线粒体自噬作为抵抗细胞应激的内在保护机制，对于清                            自国药集团汕头金石制药有限公司；ATP、FFA酶联免疫
          除受损线粒体、维持线粒体形态和功能、减少ROS产生、                          吸附测定（ELISA）试剂盒和兔 p62、B 细胞淋巴瘤 2（B
          保证能量代谢至关重要           [6―7] 。可见，靶向调节线粒体自             cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 related
          噬可能是CHF的重要治疗途径。                                     X protein，Bax）多克隆抗体（货号分别为 JYM0725Ra、
              强心汤是广西名中医卢健棋教授治疗 CHF 的有效                        RA20313、PAB46078、PAB33482、PAB46088）均购自武
              [8]
          验方 。该方能通过上调人第 10 号染色体缺失的磷酸                          汉贝茵莱生物科技有限公司；兔TBK1多克隆抗体（货号
          酶及张力蛋白同源基因诱导激酶1（phosphatase and ten‐                DF7026）购自美国 Affinity 公司；兔甘油醛-3-磷酸脱氢
          sin  homologue  deleted  on  chromosome  ten  gene-induced   酶（GAPDH）多克隆抗体、ECL化学发光底物（超敏）（货
          putative kinase 1，PINK1）、E3 泛素连接酶 Parkin 的表达        号分别为 BL006B、BL523A）均购自兰杰柯科技有限公
          来促进线粒体自噬、减少 ROS 生产和抑制心肌细胞凋                          司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G 二
          亡，从而发挥改善心功能的作用 。PINK1、Parkin 分别                     抗、Masson 三色染色液（货号分别为 GB23303、G1006）
                                      [9]
          通过线粒体融合蛋白 1、2 和选择性自噬接头蛋白 p62、                       均购自武汉塞维尔生物科技有限公司；高效 RIPA 组织/
          TANK结合激酶1（TANK-binding kinase 1，TBK1）2种不            细胞裂解液、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、聚丙烯酰胺凝
          同下游因子调控途径来介导线粒体自噬                  [10―11] 。基于此，    胶 电 泳 促 凝 剂 、TBST 缓 冲 液（货 号 分 别 为 R0010、
          本研究拟从线粒体自噬角度出发，进一步明确强心汤对                            PC0020、T8090、T1082）均购自北京索莱宝科技有限公
          PINK1/Parkin信号通路下游TBK1、p62等重要线粒体自                   司；腺苷一磷酸（adenosine monophosphate，AMP）ELISA
          噬因子的调控作用及对线粒体形态、能量代谢的影响，                            试剂盒（货号 JYM0575Ra）购自武汉基因美生物科技有
          以期为该方的临床应用提供更深入的科学依据。                               限公司。
          1 材料                                                1.3 实验动物
          1.1 主要仪器                                                本研究所用动物为健康清洁级成年雄性 SD 大鼠，
              本研究所用主要仪器包括 ECG-1103G Vet 型心电                   共40只，体重（220±25） g，购自斯贝福（北京）生物技术
          图机（深圳市凯沃尔电子有限公司）、DW-3000c 型小动                       有限公司，实验动物生产许可证号为 SCXK（京）2019-
          物呼吸机（北京众实迪创科技发展有限责任公司）、KD-                          0010。所有动物均饲养于温度 20～26 ℃、相对湿度


          · 1832 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 15                            中国药房  2024年第35卷第15期
   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43