Page 34 - 《中国药房》2024年15期

表3 各组小鼠血清中 COX-2、IL-1β、TNF-α、PGE2水 谢产物。10 种入血的原型成分包括 8 种黄酮类化合物
平测定结果（x±s，n＝8，pg/mL） （芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷、甘草苷、异甘草苷、金圣草
组别 COX-2 IL-1β TNF-α PGE 2 素、刺芒柄花素、甘草素、甘草查尔酮 B）、1 种单萜类化
空白组 23.52±2.51 45.79±7.31 201.29±28.04 216.38±23.49 合物（芍药苷）和1种三萜类化合物（甘草酸）。有效部位
模型组 34.36±2.66 a 92.21±7.60 a 407.42±35.57 a 317.98±16.52 a
阳性对照组 25.41±2.73 b 57.80±7.97 b 273.70±32.42 b 235.62±15.20 b 的总离子流图见图2，入血成分分析结果见表4。
大孔树脂流出部位组 31.93±2.92 81.20±5.40 b 385.31±34.87 304.08±18.49 3×10 5
大孔树脂90%乙醇洗脱部位组 29.50±1.66 b 72.79±1.99 bc 360.00±15.47 b 288.02±16.90 bc 2×10 5
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与大孔树 Intensity
脂流出部位组比较，P＜0.05。 1×10 5
比较，大孔树脂90%乙醇洗脱部位组小鼠血清中IL-1β、 0
0 10 20 30 40 50 60 70
PGE2水平均显著降低（P＜0.05）。上述结果表明，大孔树 t/min
脂90%乙醇洗脱部位降低4种炎症因子水平效果较好。 A.负离子模式
2.3 有效部位入血成分分析
4×10 5
综合大鼠和小鼠实验结果，最终确定大孔树脂90%
乙醇洗脱部位为芍药甘草汤缓急止痛的有效部位，进一 Intensity 2×10 5
步分析该部位入血成分。 0
0 10 20 30 40 50 60 70
2.3.1 动物分组、给药与样品制备 t/min
取 10 只小鼠，灌胃大孔树脂 90% 乙醇洗脱部位 2.4 B.正离子模式
图2 正、负离子模式下芍药甘草汤有效部位的总离子
g/kg，给药体积为 0.01 mL/kg，每天给药 1 次，连续 7 d。
流图
末次给药 5 min 后，对小鼠进行眼底静脉取血。将收集
到的血样置于4 ℃冰箱中静置2 h，待血清适量析出后， 3 讨论
以 3 500 r/ min 离心 10 min，收集上层血清。取血清 100 痉挛性疼痛，主要包括血管、骨骼肌或者内脏平滑
μL，加300 μL甲醇，涡旋10 min混匀，在4 ℃下以12 000 肌等的结构性（或功能性）变化，如大部分内脏痛、痛经、
r/ min 离心 10 min，取上清液，在室温下用氮气吹干；加 手术后平滑肌痉挛等 。目前常见的解痉药物主要有
[12]
200 μL甲醇将残留物复溶，涡旋混匀1 min，并在12 000
巴氯芬、托吡酯、地西泮等化学药，但其不良反应较多，
r/min条件下离心10 min，取上清液，即得分析样品。
[13]
如恶心、呕吐、记忆力减退等 。除化学药外，中药复方
2.3.2 检测方法及条件
如止痉散、补阳还五汤、葛根汤、芍药甘草汤等亦可治疗
采用高效液相色谱-飞行时间质谱（HPLC-TOF-
各种痉挛性疼痛，并因其具有价格低廉、效果佳、副作用
MS）技术对灌胃有效部位后的小鼠血清进行分析。取
[3]
少等优点 ，在临床的应用逐年增多，但其存在药效物质
“2.3.1”项下分析样品，按照以下色谱和质谱条件进样检
基础不明确和作用机制不清楚等问题。因此，阐明上述
测：采用 Agilent TC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱
复方治疗痉挛性疼痛的活性组分与作用机制，对指导其临
柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）为流动相进行梯度洗
床合理应用和研发创新中药具有重要意义。
脱（0～14 min，5%A→16%A；14～28 min，16%A→
现代药理研究表明，芍药甘草汤能显著抑制平滑肌
25.3%A；28～38 min，25.3%A→25.5%A；38～40 min，
和骨骼肌的收缩，对全身内外肌肉痉挛引起的疼痛有良
25.5%A→38%A；40～60 min，38%A→50%A）；柱温为
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好的解痉和镇痛作用 。临床研究表明，芍药甘草汤在
30 ℃；流速为0.8 mL/min；进样体积为10 μL。离子源为
治疗神经病理性疼痛、哮喘、胃肠道痉挛方面效果显著。
电喷雾离子源，在正、负离子扫描模式下检测，离子源温
本研究通过大鼠离体肠张力实验发现，将芍药甘草汤乙
度为 600 ℃；载气为高纯度 N2；碰撞能量为 35 eV；扫描
范围为质荷比（m/z）50～1 500。 酸乙酯萃取物经大孔树脂 90% 乙醇洗脱后得到的有效
2.3.3 数据处理 部位可显著降低由乙酰胆碱作用下的肠张力，且其小肠
采用PeakView软件对实验数据进行分析处理，将得 张力抑制率明显高于全方水提液，这提示大孔树脂90%
到的数据结果与相关文献及 PubChem 在线数据库进行 乙醇洗脱部位保留了芍药甘草汤的解痉活性。小鼠醋
比对，对各个色谱峰进行初步推测，得到化合物的准分 酸扭体实验表明，大孔树脂90%乙醇洗脱部位具有明显
子离子峰和二级碎片离子、分子式等信息，再结合相关 的镇痛效果。COX-2、IL-1β、TNF-α、PGE2是常见的与
[15]
文献、对照品色谱图及质谱裂解规律，进一步对化合物 缓急止痛有关的炎症因子 。本研究结果显示，大孔树
进行推测及鉴定。 脂 90% 乙醇洗脱部位可显著降低小鼠血清中上述 4 种
2.3.4 原型成分及代谢产物分析结果 炎症因子水平，从而发挥缓急止痛作用。
在小鼠血清中初步鉴定出10种原型成分和22种代 本研究采用 HPLC-TOF-MS 法对大孔树脂 90% 乙

· 1828 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 15 中国药房 2024年第35卷第15期