Page 62 - 《中国药房》2024年14期
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[1]
          风湿性关节炎、跌打损伤和骨折等症 。现代研究表明，                           2 方法与结果
          小钻的主要化学成分是木脂素和三萜类化合物，具有抗                            2.1 HPLC特征图谱的建立
          肿瘤、抗氧化等多种药理活性 。                                     2.1.1 色谱条件
                                   [2]
              小钻现行质量标准收载于《广西壮族自治区瑶药材                              采用依利特 Hypersil ODS C18 （250 mm×4.6 mm，5
          质量标准（第一卷）》，包括来源、性状、检查、浸出物等项                         μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.5%磷酸溶液（B）为流动相进
            [3]
          目 ，但是缺乏对其内在质量的系统性研究，无法对该药                           行 梯 度 洗 脱（0～15  min，30%A→50%A；15～25  min，
          材质量进行全面、有效的控制。本课题组前期研究发                             50%A→70%A；25～35 min，70%A→95%A；35～45 min，
          现，小钻提取物具有显著的抗炎、镇痛作用，且从小钻药                           95%A→30%A；45～50 min，30%A）；流速为1.0 mL/min；
          材中可分离得到安五脂素            [4―5] 。文献报道，安五脂素具            柱温为30 ℃；检测波长为210 nm；进样量为10 μL。
          有抗炎、保肝、抗胃溃疡等药理作用               [6―7] 。基于此，本研        2.1.2 混合对照品溶液的制备
          究采用高效液相色谱（HPLC）法建立了 10 批广西不同
                                                                  精密称取长南五味子素E、南五味子内酯A、安五脂
          产地小钻药材的特征图谱以及安五脂素的含量测定方
                                                              素对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为 21.83、
          法，并考察了安五脂素的抗炎活性，以期为广西民族药
                                                              17.48、27.65 μg/mL的混合对照品溶液。
          小钻药材的质量控制提供参考。                                      2.1.3 供试品溶液的制备
          1 材料
                                                                  取小钻药材粉末（过三号筛）约2 g，精密称定，置于
          1.1 主要仪器
                                                              250 mL 圆底烧瓶中，加入 80% 乙醇溶液 20 mL，加热回
              本研究所用主要仪器包括Waters E2695型HPLC仪
                                                              流提取 2 h，放冷，再称定质量，用 80% 乙醇补足减失的
         （美国 Waters 公司）、SK5200H 型超声清洗器（上海科导
                                                              质量，摇匀；重复提取 2 次，合并 3 次提取液，经 0.45 μm
          超声仪器有限公司）、CP225 型电子分析天平（德国 Sar‐
                                                              微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
          torius公司）、DZKW-S-6型电热恒温水浴锅（广西科米瑞
                                                              2.1.4 精密度试验
          实验仪器设备有限公司）、Infinite F200 pro 型多功能酶
                                                                  取小钻供试品溶液（编号S3），按“2.1.1”项下色谱条
          标仪（瑞士Tecan公司）。
                                                              件重复进样6次，以安五脂素峰为参照峰（该峰的分离度
          1.2 主要药品与试剂
                                                              好，峰面积较大且稳定，峰形较好，故以其为参照峰），计
              长南五味子素E、南五味子内酯A对照品（批号分别
                                                              算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果显示，
          为 20220413、2021109，纯度均大于 95%）由广西药用资
                                                              各共有峰的相对保留时间的 RSD 均小于 1%（n＝6），相
          源保护与遗传改良重点实验室自制；安五脂素对照品
                                                              对峰面积的 RSD 均小于 2%（n＝6），表明方法精密度
         （批号M30GB143568，纯度≥98%）购自中国食品药品检
                                                              良好。
          定研究院；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）购自美国
                                                              2.1.5 稳定性试验
          Sigma 公司；MTT 试剂盒（批号 917Q051）购自北京索莱
                                                                  取小钻供试品溶液（编号 S3），分别于室温放置 0、
          宝科技有限公司；小鼠肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis
          factor-α，TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-     4、8、12、16、20、24 h时按照“2.1.1”项下色谱条件进样测
          1β 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为                         定，以安五脂素峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留
          2411559805、1321596923、1161590923）均购自武汉博士            时间及相对峰面积。结果显示，各共有峰的相对保留时
          德生物工程有限公司；乙腈、磷酸均为色谱纯，乙醇为分                           间的 RSD 均小于 1%（n＝7），相对峰面积的 RSD 均小于
          析纯，水为超纯水。                                           3%（n＝7），表明供试品溶液在室温下放置 24 h 稳定性
              10 批小钻药材（编号 S1～S10）均采集于广西不同                     良好。
          产地，经广西药用植物园赵以民副研究员鉴定为长梗南                            2.1.6 重复性试验
          五味子 K.longipedunculata Finet et Gagnep 的根和茎，来           取小钻药材粉末（编号S3），按照“2.1.3”项下方法制
          源信息见表1。                                             备 6 份供试品溶液，再按照“2.1.1”项下色谱条件进样测
                    表1 10批小钻样品的来源信息                           定，以安五脂素峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留
           编号    采集地产地     采收时间    编号   采集地产地      采收时间       时间及相对峰面积。结果显示，各共有峰的相对保留时
           S1  广西龙胜县江底乡    2022年11月  S6  广西恭城县三江乡  2023年2月    间的RSD均小于1%（n＝6），相对峰面积RSD均小于3%
           S2  广西金秀县大樟乡    2022年11月  S7  广西金秀县长垌乡  2023年2月   （n＝6），表明方法的重复性良好。
           S3  广西金秀县县城     2022年11月  S8  广西金秀县三角乡  2023年3月
           S4  广西金秀县六拉村    2022年11月  S9  广西龙胜县和平乡  2023年3月    2.1.7 特征图谱的建立及相似度评价
           S5  广西金秀县罗香乡    2023年2月  S10  广西岑溪市波糖镇  2023年3月        取10批不同产地的小钻药材粉末适量，按照“2.1.3”
          1.3 细胞                                              项下方法制备供试品溶液，再按照“2.1.1”项下色谱条件
              鼠单核巨噬细胞RAW264.7购自上海酶研生物科技                       进样分析，记录色谱图。将所得色谱图以AIA文件格式
          有限公司。                                               导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》进


          · 1728 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 14                            中国药房  2024年第35卷第14期
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