Page 57 - 《中国药房》2024年13期
P. 57

[2]
          生活质量和心理健康产生消极影响 。现阶段，临床上                           有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 XY9R1393、XY97070、
          主要采用镇静剂、止痛剂等对坐骨神经痛进行药物镇痛                           XY90020DK、XY90206DYA），兔源离子钙结合适配器
          和手术治疗，但这些治疗方式均存在一定的副作用，且                           分子 1（ion calcium-binding adapter molecule 1，IBA1）、
                                                  [3]
          外科手术存在创伤大、恢复慢、复发率高等缺点 。研究                          cGAS单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗
          发现，小胶质细胞是中枢神经系统神经胶质细胞的主要                          （美国Santa Cruz公司，批号分别为sc-32725、sc-515777、
          组成部分，当周围神经受到损伤时，小胶质细胞被激活，                          sc-2004），兔源 STING 单克隆抗体（美国 Cell Signaling
          进一步促进肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，             Technology公司，批号3337）。
          TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）的分泌，以及           1.3 动物
          激活多种信号通路途径，参与神经炎症及疼痛的发                                 本研究所用的动物为SPF级SD大鼠，共72只，体重
          生 [4―6] 。因此，探寻新的安全有效、副作用小的天然药物                     200～240 g，雄性，由北京维通利华实验动物技术有限公
          抑制小胶质细胞活化，治疗坐骨神经痛成为临床研究的                           司提供，动物生产许可证号为SCXK（京）2021-0011。大
          重点。                                                鼠饲养于山西省大同市经济技术开发区第一医药园区，
              雷公藤甲素（triptolide，TP）是从中药雷公藤根部提                 使用许可证号为 SYXK（晋）2023-0001。本次实验已得
          取分离到的一种天然化合物，属于二萜类成分。研究发                           到山西大同大学伦理委员会批准（编号：2021025），并符
          现，TP具有抗炎、抗氧化、抗癌、免疫抑制等药理作用，对                        合动物保护和利用的相关规定。实验前所有大鼠饲养
          各种神经退行性疾病和神经炎症类疾病具有治疗作                             于室温 20～25 ℃、相对湿度 40%～60% 的动物房内。
            [7]
          用 。此外，TP还可减少外周神经损伤引起的神经性疼                          饲养期间大鼠自由摄食、饮水，适应性饲养7 d。
            [8]
          痛 。但关于 TP 对坐骨神经痛的相关影响及其机制尚                         2 方法
          不明确。环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶（cyclic guanosine                  2.1 坐骨神经痛模型的建立、动物分组与药物处理
          monophosphate-adenosine monophosphate synthase，cGAS）/  参考文献[11]方法，采用结扎法构建大鼠坐骨神经
          干 扰 素 基 因 刺 激 因 子（stimulator  of  interferon  gene，  痛模型。随机选取 60 只大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠（30
          STING）信号通路是免疫系统中常见的经典信号通路之                         mg/kg）进行麻醉，于左侧后肢股骨近中段斜切，暴露、分
          一，能够识别细胞质中的异常DNA，进而诱导炎症因子                          离出大鼠坐骨神经。在其分叉前游离出0.5 cm左右，用
                                                       [9]
          的表达，与多种神经退行性疾病和神经炎症密切相关 。                          4-0 的羊肠线绕坐骨神经主干做疏松的单结扎环，且使
                   [10]
          Morozzi 等 研究发现，周围神经损伤后，cGAS/STING                  其刚好能沿神经滑动，松紧适度。之后进行缝合，消毒。
          信号通路在大鼠的坐骨神经中上调；抑制该信号通路                            术后动物单笼饲养，3 d内注射青霉素进行抗感染治疗，
          后，小鼠脊髓的小胶质细胞活化减少，坐骨神经痛改善。                          0.1 mL/d。剩余12只大鼠除不结扎外，其余操作与前述
          基于此，本研究建立坐骨神经痛大鼠模型，予以 TP 干                         相同，记为假手术组（Sham 组）。术后 2 d 观察大鼠行
          预，观察 TP 对坐骨神经痛的改善作用，并基于 cGAS/                      为，若大鼠出现激惹行为且机械刺激缩足反射阈值
          STING 信号通路探讨其可能机制，为 TP 的进一步开发                     （paw mechanical withdrawal threshold，PWT）及热刺激缩
          利用提供参考。                                            足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency，PWL）检
          1 材料                                               测结果异常，则说明造模成功 。
                                                                                      [12]
          1.1 主要仪器                                               将造模成功的 60 只大鼠采用随机数字表法分为坐
              本研究所用的主要仪器有PL-200型热刺痛仪（成都                      骨神经痛模型组（Model组）、吲哚美辛组（阳性对照，7.5
                                                                  [13]
          泰盟软件有限公司）、Leica CM1860型冰冻切片机[徕卡                    mg/kg ）、低剂量 TP 干预组（TP-L 组，50 μg/kg TP）、高
                                                                                              [14]
          显微系统（上海）贸易有限公司]、AiMco Austar43型荧光                  剂量TP干预组（TP-H组，100 μg/kg TP ）和高剂量TP+
          显微镜[埃美特（厦门）科技有限公司]、SpectraMax iD5                  STING激活剂干预组（TP-H+DMXAA组，100 μg/kg TP+
                                                                             [15]
          型酶标仪（陕西科仪科技有限公司）。                                  25 mg/kg DMXAA ），每组 12 只。各给药组大鼠腹腔
          1.2 主要药品与试剂                                        注射相应药物，每日1次，共14 d；Sham组、Model组大鼠
              本研究所用的主要药品与试剂有 TP 对照品（上海                       每日腹腔注射等体积生理盐水，共14 d。
          源叶生物科技有限公司，批号 B20709，纯度≥98%），                      2.2 大鼠PWT检测
          STING 激活剂 DMXAA、吲哚美辛对照品（美国 Med‐                        末次给药 2 h 后，采用 Von Frey 针刺实验检测大鼠
          ChemExpress公司，批号分别为HY-10964、HY-14397，纯             双侧后足 PWT，具体操作如下：将大鼠置于底部为细钢
          度均不低于 98%），IL-1β 酶联免疫吸附检测（ELISA）试                  丝网格的笼子中，用不同规格的Von Frey探针垂直于皮
          剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号E-EL-                        肤缓慢直刺后足掌，用力使 Von Frey 探针弯曲 6～8 s，
          R0012），TNF-α ELISA 试剂盒、苏木精-伊红（HE）染色                当后足缩回时，记录此时的纤维丝刺激强度值，即为
          试剂盒、尼氏染色液、反转录试剂盒（上海信裕生物科技                          PWT（g）。


          中国药房  2024年第35卷第13期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13    · 1595 ·
   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62