Page 53 - 《中国药房》2024年13期
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2.4.2 线性关系与定量下限考察                                  白血浆50 μL，涡旋混匀，以氮气吹干，加入200 μL甲醇
              取“2.2.2”项下血浆/脑脊液混合对照品溶液适量，梯                    复溶后进样分析，将各成分峰面积记作B；计算提取回收
          度稀释后，按“2.3”项下方法处理，按“2.1”项下条件进样                     率（提取回收率＝A/B×100%）。另外以水代替空白血
          分析，记录色谱图。以麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、                          浆，按上述方法处理，将各成分峰面积记作C，计算基质
          苦杏仁苷的质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标                           效应（基质效应＝B/C×100%）。同法考察脑脊液的提
         （Y），采用加权最小二乘法进行线性回归。结果显示，各                          取回收率与基质效应。结果显示，血浆的提取回收率为
                                         2
          成分在相应范围内线性关系良好（R ＞0.99），符合生物                       77.48%～86.94%、基 质 效 应 为 87.37%～103.26%（n＝
          样本分析方法的要求。结果见表2和表3。                                6），脑脊液的提取回收率为 75.26%～94.87%、基质效应
              表2 各成分在血浆中的线性范围和定量下限                           为 89.12%～108.45%（n＝6），表明该分析方法符合生物
          化合物          标准曲线        R 2  线性范围/（ng/mL） 定量下限/（ng/mL）  样品分析要求。
                         －2
          麻黄碱/伪麻黄碱  Y＝1.57×10 X+7.31×10 －3  0.992 9  0.1～6 400  0.1  2.5 药动学实验
                         －2
          甲基麻黄碱    Y＝2.50×10 X－1.05×10 －3  0.993 0  0.2～480  0.2  2.5.1 药物制备
          苦杏仁苷     Y＝3.09×10 X+5.91×10 －3  0.998 4  0.4～600  0.4
                         －3
                                                                 麻黄、杏仁以 2∶1（m/m，两者总量为 100 g）进行配
             表3 各成分在脑脊液中的线性范围和定量下限
                                                                               [7]
                                                             伍，然后参照杨丽等 方法制备麻黄-杏仁药对水煎液。
          化合物          标准曲线        R 2  线性范围/（ng/mL） 定量下限/（ng/mL）
                         －4
          麻黄碱/伪麻黄碱  Y＝2.52×10 X+7.19×10 －3  0.994 5  0.1～800  0.1  同法制备麻黄、杏仁单煎液，备用。
          甲基麻黄碱    Y＝6.25×10 X+6.56×10 －4  0.999 2  0.2～50  0.2  2.5.2 分组、造模与给药
                         －4
          苦杏仁苷     Y＝8.01×10 X+1.41×10 －4  0.993 1  0.4～300  0.4
                         －5
                                                                 将 SD 雄性大鼠随机分为空白组、模型组、麻黄组
          2.4.3 准确度与精密度考察                                   （12 g/kg，以生药量计，下同），杏仁组（6 g/kg）和麻黄-杏
              取“2.2.3”项下各成分的血浆/脑脊液 QC 样品及各                   仁药对组（麻黄 12 g/kg+杏仁 6 g/kg），每组 6 只，各给药
                                                                                                 [8]
          成分的定量下限样品（按“2.2.3”项下方法同法制备）适                       组剂量根据人与大鼠体表面积比计算而得 。除空白组
          量，按“2.3”项下方法处理，再按“2.1”项下条件进样分                      外，其余各组大鼠置于超声雾化器的密闭玻璃罩内，用
          析，每个浓度平行6份。日内连续进样，计算日内精密度                          2%氯化乙酰胆碱和0.4%磷酸组胺的等体积混合液喷雾
          [以相对标准偏差（RSD）表示]；连续进样 3 d，计算日间                     诱发哮喘模型，每天 1 次，连续 7 d。当大鼠出现呼吸加
          精密度（以RSD表示）；并将峰面积比值代入当日标准曲                         快、口唇发绀、腹肌痉挛、点头呼吸、站立不稳等特征时，
                                                                         [9]
          线，计算实测浓度，考察准确度[以相对误差（RE）表示]。                       表明造模成功 。在每次造模前1 h，空白组和模型组大
          结果显示，血浆 3 个浓度 QC 样品及各成分定量下限样                       鼠灌胃等体积生理盐水，其余各组大鼠灌胃相应药物，
          品的日内 RSD＜14.3%、RE 为－11.76%～14.58%（n＝               每天1次，连续7 d。
          6），日间 RSD＜12.6%、RE 为－5.38%～9.46%（n＝18）；            2.5.3 样品采集及药动学参数分析
          脑脊液3个浓度QC样品及各成分定量下限样品的日内                               末次给药并激发哮喘后，分别于给药前（0 h）和末次
          RSD＜12.9%、RE 为 －9.47%～12.3%（n＝6），日 间               给 药 后 0.08、0.17、0.33、0.67、1.00、1.33、2.67、5.33、
          RSD＜11.72%、RE 为－10.36%～12.57%（n＝18），均符             10.67、21.33 h眼眶采血0.5 mL，并置于肝素处理过的离
          合生物样品分析要求。                                         心管中，以3 500 r/min离心10 min，取上清液置于－80 ℃
          2.4.4 稳定性考察                                        冰箱保存待测；另外，采用小脑延髓池穿刺法于给药前
              取“2.2.3”项下各成分的血浆/脑脊液QC样品适量，                   （0 h）和末次给药后 0.17、0.33、0.67、1.33、2.67、5.33、
          按“2.3”项下方法处理，再按“2.1”项下条件进样分析，每                     10.67 h 收集脑脊液（具体操作方法参考文献[10―11]）
          个浓度平行6份；分别考察各样品在处理前室温放置2 h、                        80 μL于0.5 mL离心管中，备用。取上述血浆样品和脑
          处理后自助进样器放置12 h以及反复冻融（－20 ℃至室                       脊液样品，按“2.3”项下方法处理，再按“2.1”项下条件进
          温冻融循环）3次条件下的稳定性。结果显示，各样品在                          样分析，然后代入当日建立的标准曲线中计算各样品中
          不同条件下所得峰面积的 RSD 为 5.98%～14.27%（n＝                  各成分的质量浓度。采用DAS 2.0药动学软件通过非房
          6），表明各样品稳定性良好。                                     室模型确定主要药动学参数，包括脑脊液和血浆中的达
          2.4.5 提取回收率与基质效应考察                                 峰浓度（cmax ）、达峰时间（tmax ）、消除半衰期（t1/2 ）、药时曲
              取“2.2.3”项下各成分的血浆QC样品适量，按“2.3”                  线下面积（AUC）、平均驻留时间（MRT）、清除率（CLZ/F）、
          项下方法处理，再按“2.1”项下条件进样分析，每个浓度                        表观分布容积（VZ/F）。
          平行 6 份，将各成分峰面积记作 A；取各成分 QC 工作溶                     2.5.4 统计学方法
          液①100 μL 于不同离心管中，以氮气吹干，分别加入空                           采用SPSS 21.0软件进行统计分析。多组间比较采


          中国药房  2024年第35卷第13期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13    · 1591 ·
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