Page 40 - 《中国药房》2024年13期
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3.0×10 5
          10%B；10～20 min，10%B→30%B；20～30 min，30%B→
                                                               强度/cps
          65%B；30～35 min，65%B→95%B；35～37 min，95%B→             1.5×10 5
          100%B；37～40 min，100%B）；进样体积为2 μL；流速为
                                                                  0
          0.3 mL/min；柱温为40 ℃。                                        2.50          7.50             12.50           17.50           22.50          27.50            32.50         37.50
                                                                                       t/min
          2.3.2 质谱条件                                                                A.正离子模式
                                                        E
              离子源为电喷雾离子源，采用全信息串联质谱（MS ）                         6×10 4
          数据采集模式，质量扫描范围为 m/z 50～1 500。于正、                      强度/cps  3×10 4
          负离子模式下进行检测，毛细管电压分别为 3.0 kV（+）
          和 2.5 kV（－）；锥孔电压为 40 V，锥孔气流量为 50 L/h；                   0  2.50          7.50             12.50           17.50           22.50          27.50            32.50         37.50
          脱溶剂氮气流量为600 L/h，氩气流量为0.15 mL/min；脱                                           t/min
                                                                                    B.负离子模式
          溶剂气温度为300 ℃；离子源温度为120 ℃；低能通道中
                                                              图1 鸡骨草水提物在正、负离子模式下的基峰色谱图
          碰撞能量为6 eV，高能通道中碰撞能量为20～35 eV。
          2.3.3 数据处理                                          碱类化学成分，该类生物碱的支链容易发生断裂。例
                                                                                                            +
              首先建立鸡骨草的化学成分数据库，基于UNIFI平                        如，化学成分8的准分子离子峰为m/z 219.112 4[M+H] ，
          台快速分析鸡骨草水提物化学成分；然后参照鸡骨草水                            推测其化学式为 C12H14N2O2。准分子离子峰丢失 1 分子
          提物化学成分鉴定结果，经背景扣除、提取离子色谱对                            CH3与1分子NH2生成m/z 188.072 0的碎片离子，继续丢
          比后，以在鸡骨草给药组生物样品、鸡骨草水提物中同                            失1分子H2O形成m/z 170.047 7的碎片离子。碎片离子
          时检测到，但在空白组生物样品中未检测到的色谱峰作                            m/z 143.060 8 是在 m/z 188.072 0 的基础上丢失 1 分子
          为原型成分，并进行鉴定。基于原型成分鉴定结果，应                            CO2 形成的。准分子离子峰丢失 1 分子 C3H5NO2 形成
          用 UNIFI 代谢产物分析模块，经背景扣除、质量亏损过                        m/z 132.083 0的碎片离子。通过与文献[5―6]和对照品
          滤后，以在鸡骨草给药组生物样品中检测到，但在空白                            比对，鉴定化学成分8为相思子碱。
          组生物样品、鸡骨草水提物中未检测到，且与已鉴定的                               （2）黄酮类成分鉴定。本研究共鉴定了 8 个黄酮类
          原型成分之间存在一定代谢转化关系的色谱峰作为代                             化学成分，以黄酮碳苷为主，六碳糖的碳苷糖容易发生
          谢产物。此外，低/高能质谱图信息、对照品及文献比对、                          糖环断裂产生 90 Da（C3H6O3 ）和 120 Da（C4H8O4 ）的特征
          碎片离子分析等被用于成分的辅助鉴定。                                  中性丢失；五碳糖的碳苷则易产生 60 Da（C2H4O2 ）和 90
                                                                                      [6]
              具体参数设定如下：保留时间为 0.1～40.0 min；质                   Da（C3H6O3 ）的特征中性丢失 。例如，化学成分17和19
                                                        +
          量范围为m/z 50～1 500；正离子模式加合离子为[M+H] 、                  为同分异构体，化学成分 17 的准分子离子峰是 m/z
                                                                            －
                                     －
                                                 －
          负离子模式加合离子为[M－H] 、[M+COOH] ；保留时                      563.139 7[M－H] ，推测其化学式为C26H28O14；准分子离
          间公差为0.1 min；峰值检测阈值为500 counts；质量精度                  子峰丢失 1 分子 C3H6O3形成 m/z 473.107 8 的碎片离子，
          公差为±10 ppm；正、负离子模式下的校正质量分别为                         丢失 1 分子 C4H8O4形成 m/z 443.097 8 的碎片离子；碎片
          m/z 556.276 6、m/z 554.262 0；质量偏移窗为±320 Da，质         离子m/z 443.097 8丢失1分子C2H4O2形成m/z 383.067 4
          量亏损偏移为±70 mDa；生物转化反应设置为甲基化、                         的碎片离子，丢失 1 分子 C3H6O3形成 m/z 353.066 4 的碎
          去甲基化、乙酰化、羟基化、还原化、脱羧化、半胱氨酸偶                          片离子。化学成分19的质谱裂解方式与化学成分17相
          联化、葡萄糖醛酸化、硫酸化等。                                     似。结合文献[7]和对照品比对，推测化学成分 17 和 19
          2.4 成分分析                                            分别为夏佛塔苷和异夏佛塔苷。
              采用 UPLC-Q-TOF/MS 技术对鸡骨草水提物和入                    2.4.2 血浆样品中药源性成分鉴定
          血、入肝成分进行采集和分析，结果共鉴定了60个化学                               本研究从给药血浆样品中共鉴定了19个化合物，包
          成分，其中从鸡骨草水提物中鉴定了30个化学成分，从                           括 10 个原型成分和 9 个代谢产物，在正、负离子模式下
          血浆样品中鉴定了19个化学成分，从肝脏样品中鉴定了                           空白血浆样品和给药血浆样品的提取离子色谱图见图
          11个化学成分。                                            2，具体质谱数据见表2。
          2.4.1 鸡骨草水提物化学成分鉴定                                     （1）原型成分鉴定。P1～P10 为给药血浆样品中的
              鸡骨草水提物在正、负离子模式下得到的基峰色谱                          原型成分，参照鸡骨草水提物化学成分鉴定结果，分别
          图见图 1。基于 UNIFI 平台和自建化学成分数据库，结                       将其鉴定为葫芦巴碱、番石榴酸、相思子碱、原儿茶酸、
          合质谱数据信息、碎片离子分析、对照品比对及文献查                            下箴刺桐碱、维采宁Ⅱ、栀子苷、夏佛塔苷、牡荆素和对
          阅等，共鉴定了30个化学成分，其中生物碱类7个、黄酮                          羟基苯甲酸。
          类8个、有机酸类9个、环烯醚萜类3个和其他类3个，具                             （2）代谢产物鉴定。PM1～PM9为给药血浆样品中
          体质谱数据见表 1。另外，笔者选择鸡骨草水提物中生                           的代谢产物，笔者以PM1～PM5为例阐述其鉴定过程。
          物碱类、黄酮类代表性化学成分阐释其鉴定过程。                                  PM1和PM3的准分子离子峰分别为m/z 188.985 2、
                                                                            －
             （1）生物碱类成分鉴定。本研究共鉴定了 7 个生物                        188.984 7[M－H] ，推测其化学式为 C6H6O5S，碎片离子

          · 1578 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13                            中国药房  2024年第35卷第13期
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