Page 39 - 《中国药房》2024年13期
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制氧化应激和炎症反应、调节肠道微生物，从而对四氯                           溶，以甲醇为溶剂，制备成单个对照品贮备液（1 mg/mL）
          化碳或对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤发挥改善                            及混合对照品溶液（各对照品的质量浓度均为10 μg/mL）。
          作用  [2―3] ；此外，其还可通过调节血脂水平、减少肝脏脂                    2.1.2 鸡骨草水提物样品的制备
                                      [4]
          质积累等改善脂肪肝出血综合征 。                                       取鸡骨草药材10 kg，加入10倍量水，加热回流提取
              中药进入体内后以原型成分或代谢产物通过血液                          2次，每次1.5 h；将2次滤液合并、减压浓缩干燥，得到鸡
          介质到达靶器官，从而发挥相应的药理作用。目前关于                           骨草水提物粉末 1.2 kg。称取 10 mg 水提物粉末，加 10
          鸡骨草化学成分的研究多集中在提取物层面，而其是何                           mL 甲醇，超声 30 min（功率 150 W，频率 50 kHz，下同），
          种成分吸收入血，到达肝脏发挥保肝作用尚不明确。基                           经0.22 μm 微孔滤膜过滤，得鸡骨草水提物样品（8.33
          于此，本研究采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质                          mg/mL，以生药量计）。
          谱（UPLC-Q-TOF/MS）技术和 UNIFI 平台，对鸡骨草水                 2.2 生物样品制备
          提物、入血成分、入肝成分进行逐层分析，解析其体内药                          2.2.1 血浆和肝脏样品的采集
          源性成分群，以期为阐释其药效物质基础提供科学                                 将 SD 大鼠随机分为鸡骨草给药组（0.63 g/kg，以生
          依据。                                                药量计；n＝6）和空白组（n＝3），禁食（自由饮水）12 h
          1 材料                                               后，各组大鼠灌胃相应药液/超纯水，单次给药。鸡骨草
          1.1 主要仪器                                           给药组大鼠分别于灌胃0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h后腹
                                                             主动脉取血，置于含有肝素钠的离心管内，于 4 ℃条件
              Acquity  UPLC  I-Class 型 超 高 效 液 相 色 谱 系 统 、
                                                             下以 4 000 r/min 离心 15 min，吸取上清液，得给药血浆
          Xevo G2-XS Q-TOF 型四极杆飞行时间质谱仪（配有
                                                             样品。采集血液样品之后，随即处死大鼠后采集肝脏样
          UNIFI平台和Masslynx 4.1质谱工作站）均购自美国Wa‐
                                                             品，以生理盐水冲洗肝脏表面浮血，滤纸吸去水分，得到
          ters公司；ME204/02型电子天平购自瑞士Mettler Toledo
                                                             给药肝脏样品。空白组大鼠分别于灌胃超纯水0.5、2.0、
          公司；H1650-W型离心机购自湖南湘仪实验室仪器开发
                                                             6.0 h 后取血和肝脏，采集方法同鸡骨草给药组，得到空
          有限公司；Milli-Q型超纯水制备仪购自美国Millipore公
                                                             白血浆样品和空白肝脏样品。所有生物样品于－80 ℃
          司；Labconco CentriVap 制冷型离心浓缩仪购自美国
                                                             超低温冰箱中冷冻保存，备用。
          Labconco 公司；JXDC-200 型氮气吹扫仪购自上海净信
                                                             2.2.2 血浆样品前处理
          实业发展有限公司。                                              吸取6个时间点的鸡骨草给药组大鼠血浆样品各1
          1.2 主要药品与试剂
                                                             mL 于离心管中合并，加入 3 倍体积的乙腈（预先 4 ℃冷
              鸡骨草药材（批号20210101，产地广西）购自北京本
                                                             藏 24 h）涡旋混匀 5 min；于 4 ℃条件下以 4 000 r/min 离
          草方源药业有限公司，经广西中医药大学药学院谭勇教
                                                             心15 min，取上清液，氮气吹干；残渣用500 μL甲醇超声
          授鉴定为豆科植物广州相思子 A. cantoniensis Hance 的
                                                             提取 10 min，于 4 ℃条件下以 12 000 r/min 离心 15 min，
          干燥全株。相思子碱、下箴刺桐碱、原儿茶酸、夏佛塔
                                                             取上清液备用。吸取3个时间点空白组大鼠血浆样品各
          苷、异夏佛塔苷对照品（批号分别为RFS-X03911812026、
                                                             2 mL于离心管中合并，后续处理方法同鸡骨草给药组血
          RFS-X06801909002、RFS-Y03111812016、AF21061501、
                                                             浆样品。
          AF21062602，纯度均大于 98%）均购自成都瑞芬思生物
                                                             2.2.3 肝脏样品前处理
          科技有限公司；二甲基亚砜（批号 RNBJ6688）购自美国
                                                                 称取 6 个时间点的鸡骨草给药组大鼠肝脏样品各
          Sigma公司；质谱级乙腈、甲醇、甲酸均购自美国Thermo                     0.8 g，分别加入 0.8 mL 生理盐水和若干颗研磨球，置于
          Fisher Scientific公司；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
                                                             2 mL离心管中，4 ℃冷冻研磨15 min制成匀浆液。分别
          1.3 实验动物                                           吸取上述 6 个时间点的肝脏匀浆液各 1 mL 于离心管中
              本研究所用健康雄性 SPF 级 SD 大鼠共 9 只，体重                  合并，加入 3 倍体积的乙腈（预先 4 ℃冷藏 24 h）涡旋混
          200～250 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动                      匀 5 min；于 4 ℃条件下以 4 000 r/min 离心 15 min，取上
          物生产许可证号为 SCXK（湘）2019-0004。大鼠购入后                    清液，于25 ℃条件下离心浓缩干燥；残渣用500 μL甲醇
          在广西中医药大学动物实验中心适应性饲养 6 d，自由                         超声提取 10 min，于 4 ℃条件下以 12 000 r/min 离心 15
          摄食、饮水，给药前禁食 12 h、自由饮水。饲养环境：室                       min，取上清液备用。分别称取3个时间点的空白组大鼠
          温20～25 ℃，相对湿度60%～80%。本实验动物方案已                      肝脏样品各1.6 g，每0.8 g放置于2 mL离心管中，后续处
          获得广西中医药大学实验动物伦理委员会的批准。                             理方法同鸡骨草给药组肝脏样品。
          2 方法与结果                                            2.3 分析条件
          2.1 药物制备                                           2.3.1 色谱条件
          2.1.1 对照品溶液的制备                                         采 用 ACQUITY  PRM  HSS  T3  FIT 色 谱 柱（100
              精密称定相思子碱、下箴刺桐碱、原儿茶酸、夏佛塔                        mm×2.1 mm，1.8 μm），以 0.1% 甲酸（A）-乙腈（B）为流
          苷、异夏佛塔苷等对照品各 1 mg，用少量二甲基亚砜助                        动相进行梯度洗脱（0～3 min，5%B；3～10 min，5%B→


          中国药房  2024年第35卷第13期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13    · 1577 ·
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