Page 27 - 《中国药房》2024年13期
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infiltration.  Compared  with  IBD  group，  the  above  indexes  of  rats  were  improved  significantly  in  low-dose  and  high-dose  FMN
          groups （P＜0.05）， in dose-dependent manner （P＜0.05）. VTPF significantly alleviated the effects of FMN on the above indexes of
          IBD rats （P＜0.05）. CONCLUSIONS  FMN may promote the expression of YAP by inhibiting the Hippo/YAP signaling pathway，
          thereby inhibiting apoptosis of intestinal epithelial cells in IBD rats.
          KEYWORDS    formononetin； Hippo/YAP signaling pathway； inflammatory bowel disease； intestinal epithelial cells； cell apoptosis



              炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一        6，IL-6）、IL-10酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immu‐
          种慢性、炎症性的肠道疾病，发病原因不明且容易反复                           nosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号分别为 JEM-08、
          发作，主要有溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）和克              JER-04、JER-05）均购自上海中乔新舟生物科技有限公
          罗恩病2种类型，患者的临床表现主要有反复发作的腹                           司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒、TUNEL试剂盒（批号
                       [1]
          痛、腹泻或便血 。现阶段，IBD的发病机制研究还不完                         分别为 C0105S、C1086）均购自上海碧云天生物技术有
          善，研究者们主要认为其发生与遗传、炎症反应、免疫、                          限 公 司 ；兔 源 YAP、切 割 型 胱 天 蛋 白 酶 3（cleaved
                                  [2]
          精神因素等的共同作用有关 。研究表明，肠上皮细胞                           cysteine-containing  aspartate  proteolytic  enzyme  3，
          的功能障碍与缺失、凋亡等加速了 IBD 的病理进程；另                        cleaved-caspase-3）、B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lymphoma-2，
          外，肠道免疫反应、炎症介质增加等也与 IBD 的发生发                        Bcl-2）、Bcl-2 相 关 X 蛋 白（Bcl-2-associated  X  protein，
                    [3]
          展密切相关 。因此，开发抑制肠上皮细胞凋亡、改善炎                          Bax）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate
          症反应的新药对IBD的治疗具有重要意义。                               dehydrogenase，GAPDH）一抗和辣根过氧化物酶标记的
              芒柄花素（formononetin，FMN）是源自黄芪、狼麻等                山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（批号分别为 4912S、
          植物根的一种天然异黄酮类化合物，又称刺芒柄花素。                           abs132005、3498T、2772T、2118T、7074S）均购自上海优
          研究发现，FMN具有良好的抗氧化、抗炎、抗癌、降血脂、                        宁维生物科技股份有限公司。
                              [4]
          抗心律不齐等药理作用 ，并可减轻右旋糖酐硫酸钠诱                           1.3 动物
                                            [5]
          导的UC小鼠结肠炎症，改善其肠道菌群 。以上研究提                              本研究所用动物为 SPF 级 6～8 周龄的雄性 SD 大
          示，FMN 可能具有治疗 IBD 的作用。Hippo/Yes 相关蛋                 鼠，共60只，体重180～220 g，购自北京智飞绿竹生物制
          白（Yes associated protein，YAP）信号通路是调控细胞增            药有限公司，动物使用许可证号为 SYXK（京）2021-
          殖与凋亡、调控组织再生、促进组织自我更新与分化的                           0070。所有大鼠均饲养在温度（22±2） ℃、相对湿度
          经典信号通路，其关键分子 YAP 可在肠道再生时活化，                        40%～60%、昼夜交替间隔 12 h、通风的 SPF 级动物房
          当YAP缺失时肠道细胞的再生能力受损，进而影响IBD                         内，适应性饲养1周后用于实验。本研究对动物的操作
                    [6]
          的发生发展 。基于此，本研究拟通过建立 IBD 大鼠模                        均符合动物伦理学“3R”原则。
          型，探究 FMN 是否可通过调控 Hippo/YAP 信号通路减                   2 方法
          轻 IBD 大鼠肠上皮细胞凋亡，为 FMN 应用于临床治疗                      2.1 大鼠IBD模型的建立
          IBD提供参考。                                               所有大鼠禁食不禁水24 h后，腹腔注射30 mg/kg戊
          1 材料                                               巴比妥钠进行麻醉，然后随机选取 48 只大鼠，采用
          1.1 主要仪器                                           TNBS 诱导的方式建立 IBD 大鼠模型 ：以塑料软管（直
                                                                                             [7]
              本研究所用的主要仪器包括 Tanon 2500/2500R 型                径2 mm）从大鼠肛门处插入约8 cm，之后将TNBS缓冲
          凝胶图像处理系统（上海天能科技有限公司）、Synergy                       液（20 mg/kg）与无水乙醇等体积混合，对大鼠进行灌
                                                        TM
          H1型酶标仪（美国Bio-Tek公司）、STELLARIS 5 Cryo型              肠。若灌肠 3 d 后出现腹泻、脓血便、厌食等现象，则说
          光学显微镜[徕卡显微系统（上海）贸易有限公司]等。                          明大鼠 IBD 模型构建成功。剩余 12 只大鼠灌肠等量的
          1.2 主要药品与试剂                                        生理盐水，设为正常组（Normal组）。
              FMN 原料药（经高效液相色谱法检测其纯度≥                         2.2 大鼠分组与给药
          98%，批号XIYU-BP39060）购自北京寰宇科创生物科技                        将造模成功的 48 只大鼠按照随机数字表法分为模
          公 司 ；YAP 抑 制 剂 Verteporfin 对 照 品（VTPF，纯 度          型组（IBD组）、低剂量FMN组（FMN-L组）、高剂量FMN
          99.26%，批号 HY-B0146）购自美国 MedChemExpress 公           组（FMN-H 组）和高剂量 FMN+YAP 抑制剂 VTPF 组
          司；三硝基苯磺酸（trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS；      （FMN-H+VTPF 组），每组 12 只。FMN-L 组、FMN-H 组
          批号 P2297）购自美国 Sigma 公司；肿瘤坏死因子 α（tu‐                大鼠分别灌胃 20、40 mg/kg FMN（以生理盐水为溶
                                                                [8]
          mor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素6（interleukin-   剂） ，并腹腔注射等体积生理盐水；FMN-H+VTPF组大

          中国药房  2024年第35卷第13期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13    · 1565 ·
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