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3.7 PA对CRF大鼠肾组织中相关蛋白表达的影响                          纤维化也是导致肾结构紊乱和肾功能不可逆丧失的主
              与 Sham 组 比 较 ，CRF 组 大 鼠 肾 组 织 中 RhoA、          要病理因素 。上皮-间质转化是引发肾纤维化的重要
                                                                       [9]
          ROCK1、TGF-β1、NKD2、α-SMA蛋白的表达水平均显著                  原因，肌成纤维细胞是负责胶原合成、沉积的主要细胞，
          升高（P＜0.05）；与 CRF 组比较，PA 各剂量组大鼠肾组                   其表达的α-SMA可作为组织纤维化发生的标志蛋白之
          织中上述蛋白的表达水平均显著降低，且呈剂量依赖性                           一，并可介导多种炎症介质的分泌和释放                  [12―13] 。多功能
         （P＜0.05）；与PA-H组比较，PA-H+LPA组大鼠肾组织中                   细胞因子 TGF-β1表达的增加与多种因素致损伤所引发
                                                                                                          [14]
          上述蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）。结果见图                        的肾纤维化进展密切相关，是促纤维化的重要介质 。
          4、图5。                                              CTGF 在各种肾脏疾病中均呈高表达，可直接促进肾纤
                                                             维化的进展，也可作为TGF-β1的下游因子在肾小球和肾
               RhoA                              20 kDa                                          [15]
                                                             小管间质纤维化的发展中发挥重要作用 。肾纤维化
                                                             依赖于肌成纤维细胞的形成，该细胞表达的标志蛋白
              ROCK1                              158 kDa
                                                             NKD2可直接靶向作用于collagen Ⅰ的α1链，加速肾纤
                                                 44 kDa
                                                             维化形成        。本研究结果显示，与 Sham 组比较，CRF
              TGF-β 1                                                [16―17]
                                                             组大鼠肾纤维化面积占比和肾组织中 CTGF、collagen
               NKD2                              59 kDa
                                                             Ⅰ、TGF-β1、NKD2、α-SMA 蛋白表达均显著升高或上
              α-SMA                              45 kDa      调；经不同剂量PA干预后，CRF大鼠肾纤维化面积占比
                                                             和肾组织中上述蛋白表达均显著降低或下调，且呈剂量
              GAPDH                              36 kDa
                                                             依赖性，提示PA可通过抑制胶原蛋白沉积和CTGF、col‐
                   Sham组 CRF组  PA-L组 PA-M组 PA-H组 PA-H+
                                            LPA组             lagen Ⅰ、TGF-β1、NKD2、α-SMA 蛋白的表达，进而抑制
         图4 PA 对 CRF 大鼠肾组织中相关蛋白表达影响的电
                                                             炎症因子的表达及肾小管上皮细胞的上皮-间质转化，
               泳图                                            改善CRF大鼠的肾纤维化。
           2.0                                     Sham组         RhoA 是 TGF-β1的下游信号分子，其主要的下游效
                                                   CRF组
           蛋白相对表达水平  1.5                           PA-M组     应器是ROCK1，RhoA/ROCK信号通路对多种生物学过
                                                   PA-L组
                                                                            [18―19]
                                                   PA-H组
                                                             程具有调控作用
                                                                               。RhoA/ROCK 信号通路活化后，
           1.0
                                                   PA-H+LPA组
                                                             可通过激活还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4
           0.5
            0                                                而诱导肾组织中大量活性氧释放，导致 α-SMA 和 colla‐
                RhoA   ROCK1   TGF-β 1  NKD2  α-SMA          gen Ⅳ等多种纤维化蛋白表达，进而导致肾纤维化的发
             a：与Sham组比较，P＜0.05；b：与CRF组比较，P＜0.05；c：与PA-L        [20]
                                                             生 。有研究指出，抑制 RhoA/ROCK 途径能减轻肾纤
         组比较，P＜0.05；d：与PA-M组比较，P＜0.05；e：与PA-H组比较，P＜          维化，抑制 RhoA/ROCK 信号通路相关蛋白的表达可改
         0.05。                                                                               [20―21]
         图5 PA 对 CRF 大鼠肾组织中相关蛋白表达水平的影                        善脓毒症大鼠的急性肺肾损伤症状                    。本研究结果
                                                             显示，与 Sham 组比较，CRF 组大鼠肾组织中 RhoA、
               响（x±s，n＝5）
                                                             ROCK1 蛋白的表达均显著上调；经不同剂量 PA 干预
          4 讨论                                               后，CRF大鼠肾组织中RhoA、ROCK蛋白的表达均显著
              肾小管间质病变是慢性肾脏病进展的重要环节。                          下调，且血清炎症因子水平显著降低，肾纤维化明显减
          研究表明，PA可通过抗炎和抗氧化应激而改善急、慢性                          轻，提示 RhoA/ROCK 信号通路的过度激活加速了 CRF
          肾损伤 。Jiang 等 研究显示，PA 可通过降低 Scr 和                   的进展，而 PA 可能通过抑制该信号通路的过度激活而
                          [11]
                [10]
          BUN水平，改善缺血再灌注急性肾损伤小鼠的肾组织病                          减轻CRF的肾纤维化，进而保护大鼠肾功能。为验证以
          理损伤。本研究结果显示，与Sham组比较，CRF大鼠饮                        上推测，本研究以 PA 联合通路激活剂 LPA 干预 CRF 大
          食减少，体型瘦小，精神萎靡且反应迟钝，肾组织病变明                          鼠，结果显示，大鼠肾组织中 RhoA、ROCK 和纤维化标
          显，肾小管损伤评分和血清 BUN、Scr、UA、TNF-α、IL-                  志物 CTGF、collagen Ⅰ、TGF-β1、NKD2、α-SMA 蛋白的
          1β、IL-6、MDA水平均显著升高，SOD水平显著降低；经                     表达均显著上调，肾纤维化面积占比明显增加，提示
          不同剂量PA干预后，CRF大鼠的一般情况好转，肾组织                         LPA逆转了PA对CRF大鼠肾纤维化的改善作用。
          病变均有所减轻，肾小管损伤评分和血清 BUN、Scr、                            综上所述，PA能减轻CRF大鼠肾组织的病理损伤，
          UA、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平均显著降低，SOD水                改善其肾功能，减轻其肾组织纤维化、炎症和氧化应激，
          平均显著升高，且呈剂量依赖性，表明 PA 能通过抗炎、                        上述作用可能与抑制 RhoA/ROCK 信号通路的激活有
          抗氧化应激来改善 CRF 大鼠的肾功能，减轻肾损伤，且                        关。然而，CRF 的发病机制复杂多变，可能还涉及其他
          高剂量PA（20 mg/kg）的效果更好。                              信号通路，加之 PA 在 CRF 大鼠肾组织中的具体作用部
              肾纤维化是慢性肾脏病进展至终末期肾衰竭的最                          位和靶点尚未明确，故后续本课题组将结合生物信息学
          终途径，被认为是 CKD 进展的不良预后指标；同时，肾                        手段进一步分析PA的作用靶点和作用机制。


          中国药房  2024年第35卷第12期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12    · 1493 ·
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