Page 88 - 《中国药房》2024年12期
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and  the  above  quantitative  indexes  were  significantly  improved  in  a  dose-dependent  manner （P＜0.05）.  LPA  could  significantly
          reverse  the  improvement  effect  of  PA  on  the  above  indicators （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  PA  can  improve  renal  function  and
          alleviate renal fibrosis in CRF rats， which may be related to inhibiting the activation of RhoA/ROCK signaling pathway.
          KEYWORDS     pachymic acid； chronic renal failure； renal function； fibrosis； RhoA/ROCK signaling pathway



              慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）是由多种因          （货号分别为 89901、23225）均购自赛默飞世尔科技
          素引发的慢性进行性肾实质损害，以代谢物、水、电解                           （中国）有限公司；兔源Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ）、RhoA、
          质、酸碱紊乱和肾萎缩为主要特征，是世界范围内的重                            ROCK1、结缔组织生长因子（connective tissue growth
                         [1]
          要公共卫生问题 。茯苓酸（pachymic acid，PA）是中药                   factor，CTGF）、转 化 生 长 因 子 β1 （transforming  growth
          茯苓中主要的羊毛甾烷型三萜类化合物，可通过降低肿                            factor-β1，TGF-β1 ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle
          瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞           actin，α-SMA）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）一抗和
          介素6（interleukin-6，IL-6）水平来抑制肾脏炎症，改善慢                辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G
                              [2]
          性肾脏病大鼠的肾损伤 。文献报道，以PA为主要活性                           二 抗（ 货 号 ab260043、ab86297、ab97592、ab6992、
          成分的二黄方可通过抑制炎症和纤维化来改善腺嘌呤                             ab215715、ab7817、ab9485、ab6721）均购自英国 Abcam
                               [3]
          诱导的CRF大鼠肾损伤 。Rho相关卷曲螺旋形成蛋白                          公司；兔源裸角质层同源物 2（naked cuticle homolog 2，
          激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein kinase，  NKD2）一抗（货号 2073S）购自美国 Cell Signaling Tech‐
          ROCK）属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族，是 Ras 同源基因                       nology公司。
          家族成员 A（Ras homolog gene family member A，RhoA）       1.3 实验动物
          的下游激酶，RhoA/ROCK 信号通路已被证实与动脉高                            SPF 级雄性 SD 大鼠，体重（200±25）g，购自武汉大
          血压、心血管-肾脏重塑和高血压肾病密切相关，且激活                           学动物实验中心，生产许可证号为 SCXK（鄂）2019-
          RhoA/ROCK1 信号通路是加速肾纤维化的潜在机制之                        0004。所有动物均饲养于特定的无病原体动物室[室温
          一 [4―5] 。还有研究报道，与 PA 同为茯苓活性物质的茯苓                   （25±2）℃，每12 h光照/黑暗循环]，自由摄食、饮水。本
          多糖，可通过抑制RhoA/ROCK1信号通路来减轻心肌缺                        研究方案获得武汉华联科生物技术有限公司动物伦理
                       [6]
          血再灌注损伤 。基于此，本研究拟初步探讨 PA 对                           委员会审批，批准号为HLK-2022107495。
          RhoA/ROCK信号通路的作用及对CRF大鼠肾功能及纤                        2 方法
          维化的影响，以期为该病的临床治疗提供参考。                               2.1 造模、分组与给药
          1 材料                                                    根据参考文献[7]方法，采用 5/6 肾切除术建立 CRF
          1.1 主要仪器                                            大鼠模型，具体操作如下：无菌环境下，大鼠经麻醉后，
              BX43 型 光 学 显 微 镜 购 自 日 本 Olympus 公 司 ；          沿左脊骨切口，暴露左肾，迅速切除约 2/3 的肾组织，止
          CLSM600型共聚焦显微镜购自舜宇光学科技（集团）有                         血后缝合复位；1 周后，同法切除整个右肾。另取 15 只
          限 公 司 ；CLARIOstar   Plus 型 酶 标 仪 购 自 德 国 BMG        大鼠仅切口暴露肾脏，但不切除肾组织，作为假手术组
                             ®
          LABTECH 公司；ChemiDoc XRS+型凝胶成像系统购自                  （Sham组）。
          美国Bio-Rad公司。                                            切除右肾后 14 d，于大鼠目内眦取血，离心后分离
          1.2 主要药品与试剂                                         血清，检测Scr、BUN水平（具体方法见“2.2”项），若造模
              PA 对照品（货号 SP8010，纯度≥98%）购自北京索                   组大鼠上述指标的平均水平均显著高于Sham组则认为
                                                                      [7]
          莱宝科技有限公司；溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid，               造模成功 。将造模成功的大鼠分为模型组（CRF 组）、
          LPA；货号 L7260）购自美国 Merck 公司；Masson 染色试               PA低剂量组（PA-L组）、PA中剂量组（PA-M组）、PA高剂
          剂（货号MM1007）购自上海懋康生物科技有限公司；血                         量组（PA-H 组）和 PA 高剂量+ROCK 通路激活剂 LPA 组
          尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血清肌酐（serum crea-      （PA-H+LPA组），每组15只。PA-L组、PA-M组、PA-H组
          tinine，Scr）、尿酸（uric acid，UA）、TNF-α、IL-1β、IL-6 酶     大鼠分别灌胃5、10、20 mg/kg的PA药液（以二甲基亚砜
          联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂盒（货号分别为                           为溶剂，剂量参考相关文献          [2，8] 及预实验结果）并尾静脉注
          CB10659-Ra、CB11246-Ra、CB10660-Ra、CB11057-Ra、        射与LPA药液等体积的磷酸盐缓冲液（PBS）；PA-H+LPA
          CB10205-Ra、CB10218-Ra）均购自上海科艾博生物技术                  组大鼠灌胃20 mg/kg的PA药液并尾静脉注射1 mg/kg的
          有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧                 LPA药液（以PBS为溶剂）；CRF组和Sham组大鼠灌胃与
          化酶（superoxide dismutase，SOD）ELISA检测试剂盒（货            PA药液等体积的二甲基亚砜并尾静脉注射与LPA药液
          号分别为 ml077384、ml059387）均购自上海酶联生物科                   等体积的PBS。PA（二甲基亚砜）和LPA（PBS）的先后给
          技有限公司；RIPA 裂解液、BCA 蛋白浓度测定试剂盒                        药间隔时间为1 h。每天1次，连续12周。


          · 1490 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12                            中国药房  2024年第35卷第12期
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