Page 64 - 《中国药房》2024年12期
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reduced in the administration groups， and the above quantitative indicators had been significantly improved （P＜0.05）； 3-MA could
          significantly  reverse  the  improvement  effects  of  the  above  indexes  by  CUR （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  CUR  can  promote  the
          recovery of neurological and motor functions in SCI rats， improve the pathological injury of the spinal cord and inhibit apoptosis，
          which may be related to mitochondrial autophagy mediated by activating the PINK1/Parkin signaling pathway.
          KEYWORDS     curculigoside； spinal cord injury； neuroprotection； PINK1/Parkin signaling pathway； mitochondrial autophagy


              脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是由直接或间接             1.2 主要药品和试剂

          施加到脊髓的外力所致。SCI 发生后，损伤部位的神经                              CUR对照品（批号YT63684，纯度≥98%）和丙二醛
          元损失、轴突变性和脱髓鞘将进一步导致脊髓发生功能                           （malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide
                                                    [1]
          性或器质性变化，从而引起原发性和继发性损伤 。其                            dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）检测试剂
          中，继发性损伤又可通过炎症细胞浸润、氧化应激和凋                            盒（批号分别为 SY6486、YK-08006、YK-08694）均购自
          亡信号级联启动等一系列生物学过程来加剧神经元的                             北京伊塔生物科技有限公司；自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤
          损伤，故在此过程中及时进行神经保护干预可抑制神经                           （3-methyladenine，3-MA）原料药（批号 HY-19312，纯度
                                           [2]
          元的进一步坏死，促进神经功能的恢复 。由此可见，恢                           99.91%）购自美国 MedChemExpress 公司；苏木精-伊红
                                                             （HE）混合染色液（批号R22179）购自上海源叶生物科技
          复SCI神经功能可能是SCI治疗的潜在途径之一。
                                                              有 限 公 司 ；TUNEL 细 胞 凋 亡 检 测 试 剂 盒（批 号
              天然化合物具有安全性高、作用靶点多等特点，是
                                                              KGA7072）购自江苏凯基生物技术股份有限公司；兔脑
                            [3]
          药物开发的重要来源 。仙茅苷（curculigoside，CUR）是
                                                              源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，
          从中药仙茅中提取的一种天然抗氧化剂，具有抗炎、抗
                                                              BDNF）单克隆抗体、兔胶质细胞原纤维酸性蛋白（glial
          抑郁、抗骨质疏松等作用，可保护阿尔茨海默病大鼠的
                                                              fibrillary acidic protein，GFAP）多克隆抗体、兔微管相关
                                                [4]
          神经系统并有效抑制其海马区神经元的凋亡 。研究指
                                                              蛋白轻链 3（microtubule-associated protein light chain 3，
          出，线粒体自噬可清除受损线粒体，对维持线粒体稳态
                                                              LC3）多克隆抗体、兔 p62 单克隆抗体、鼠 PINK1 单克隆
                                   [5]
          和神经元存活具有关键作用 。人第 10 号染色体缺失
                                                              抗体、鼠 Parkin、鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克
          的磷酸酶及张力蛋白同源基因诱导的假定激酶1（phos‐
                                                              隆 抗 体（批 号 分 别 为 ab108319、ab7260、ab128025、
          phatase and tensin homologue deleted on chromosome ten   ab207305、ab186303、ab77924、ab8245）均 购 自 英 国
          gene-induced putative kinase 1，PINK1）/E3 泛素连接酶      Abcam 公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔 IgG 二
          Parkin信号通路是神经退行性疾病相关线粒体自噬的重                         抗 、山 羊 抗 鼠 IgG 二 抗（批 号 分 别 为 AP31L014、
          要靶点之一。其中，PINK1主要定位于受损线粒体的外                          AP31L025）均购自和元李记（上海）生物技术有限公司。
          膜，可将细胞质中的Parkin蛋白招募到线粒体内并激活                         1.3 实验动物
          Parkin蛋白下游信号的转导，从而激活线粒体自噬，进而                            SPF级SD雄性大鼠80只，体重（220±20）g，购自郑
                                     [6]
          有利于 SCI 神经元损伤的恢复 。基于此，本研究拟基                         州大学（河南省实验动物中心），动物生产许可证号为
          于PINK1/Parkin信号通路，初步探讨CUR对SCI大鼠神                    SCXK（豫）2022-0001。所有大鼠均饲养于温度 26 ℃、
          经损伤的保护作用，以期为 CUR 的进一步开发利用和                          相对湿度 60% 的环境中，自由摄食、饮水。本研究方案
          SCI的临床治疗提供参考。                                       经 濮 阳 医 学 高 等 专 科 学 校 伦 理 委 员 会 批 准 ，批 号
          1 材料                                                PY20230122。
          1.1 主要仪器                                            2 方法
                                                              2.1 SCI大鼠模型的制备
              LW100V 型光学显微镜购自西安测维光电技术有
                                                                  所有大鼠适应性喂养1周后，随机选取15只大鼠作
          限公司；CKX 53 型倒置荧光显微镜购自日本 Olympus
                                                              为假手术组，其余 65 只大鼠均参照文献[7]的方法建立
                        TM
          公司；Multiskan  FC 型酶标仪购自赛默飞世尔科技
                                                              SCI 模型：大鼠腹腔注射 1% 戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻
         （中国）有限公司；ChemiDoc MP 型凝胶成像系统购自
                                                              醉，于胸椎 T9 处行椎板切除术，暴露脊髓；以稳定夹支
                                                   ®
          伯乐生命医学产品（上海）有限公司；SpectraMax  Quick‐                 撑脊柱和暴露的T10脊髓，将10 g的金属棒从25 mm的
              TM
          Drop 型超微量分光光度计购自美谷分子仪器（上海）                          高度垂直落下撞击脊髓，造成损伤；随后，缝合肌肉并用
          有限公司。                                               金属夹夹闭皮肤；术后，每天手动排空大鼠膀胱2次，直

          · 1470 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12                            中国药房  2024年第35卷第12期
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