Page 58 - 《中国药房》2024年12期
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cells  and  ameliorate  their  functional  impairment，  and  the  above  effects  are  associated  with  the  inhibition  of  the  AGE/RAGE
          signaling pathway.
          KEYWORDS     evodiamine； high glucose； trophoblast cells； proliferation； migration；invasion； AGE/RAGE signaling pathway


              妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）       酶链式反应（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）仪（美
          是指妊娠前糖代谢正常，但妊娠期首次发现糖耐量异常                            国 ABI 公司）、Gel Doc EZ 型凝胶成像仪（美国 Bio-Rad
                               [1]
          的一种常见妊娠并发症 。GDM 的病因和发病机制十                           公司）等。
          分复杂，可能与遗传、环境、胰岛素抵抗、胰岛 β 细胞功                         1.2 主要药品与试剂
                                              [2]
          能障碍和胎盘泌乳素生成等多种因素有关 。随着当代                                吴茱萸碱对照品（批号 B6398，纯度≥98%）购自北
          女性育龄、饮食模式和生活方式的改变，GDM的发病率                           京康瑞纳生物科技有限公司；Annexin Ⅴ-FITC/PI 细胞
          逐年增加，若GDM患者未得到及时治疗，可能会产生不                           凋亡试剂盒（批号 70-AP101）购自杭州联科生物技术股
          良结局，如妊娠高血压和早产、死产、巨婴等 。因此，早                          份有限公司；TRIzol试剂（批号EZB-TZ1）购自上海海方
                                               [3]
          期诊断和及时治疗策略对降低GDM患者不良结局至关                            生物技术有限公司；PCR 扩增试剂盒（批号 XY0122）购
          重要，然而目前临床尚缺乏有效的GDM治疗药物。                             自上海信裕生物科技有限公司；反转录试剂盒（批号
              研究指出，作为母体和胎儿循环之间的桥梁，胎盘                          K1622）购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；兔 AGE
                                                        [4]
          对母体激素分泌、炎症反应和代谢调节具有一定影响 。                           多克隆抗体（批号 ab23722）、兔 RAGE 多克隆抗体（批
          滋养层细胞是胎盘屏障的主要组成部分，是母体与胎儿                            号 ab37647）、兔磷酸化核因子 κB p65（phosphorylated
          之间的首道屏障，其增殖、迁移、侵袭和凋亡与胎盘和胎                           nuclear factor-κB p65，p-NF-κB p65）单克隆抗体（批号
          儿的正常发育密切相关，其生物学功能受母体血糖的直                            ab76302）、兔 NF-κB p65 单克隆抗体（批号 ab16502）、兔
                [5]
          接影响 。可见，增强滋养层细胞的增殖、迁移、侵袭功                           基质金属蛋白酶 2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）
          能可能是GDM治疗的潜在手段之一。                                   单克隆抗体（批号 ab92536）、兔 MMP-9 单克隆抗体（批
              吴茱萸碱是从中药吴茱萸中提取的一种生物碱活                           号 ab76003）、鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克隆
          性物质，除抗炎、抗感染、抗肿瘤、保护神经作用外，还具                          抗体（批号 ab8245）和辣根过氧化物酶（HRP）标记的山
          有一定的降血糖活性，可缓解糖尿病大鼠的高血糖，并                            羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗（批号 ab6721）均购自英国
                                                        [6]
          减轻其胰岛素抵抗，缓解肝脏、胰腺、肾脏的病理损伤 ，                          Abcam 公司；DMEM 培养基（批号 abs9561）购自爱必信
                                                                                                 ®
          但吴茱萸碱能否缓解GDM尚未可知。晚期糖基化终末                           （上海）生物科技有限公司；Lipofectamine  2000 转染试
          产物（advanced glycation end product，AGE）是在非酶条         剂（批号 YZ-11668）、高效 RIPA 裂解液（批号 R0010）均
          件下，由大分子物质（包括蛋白、脂质和核酸）的游离氨                           购自北京索莱宝科技有限公司；CCK-8 试剂、化学发光
          基与还原糖的醛基发生一系列反应所生产的一种异质                             试剂（批号分别为C0038、P0018S）购自上海碧云天生物
          分子，可通过与其受体（receptor for advanced glycation          技术股份有限公司；pc-NC（阴性对照）和pc-RAGE（过表
          end product，RAGE）结合而促进氧化应激和炎症反应的                    达RAGE）质粒由广州市锐博生物科技有限公司提供。
              [7]
          发生 。研究发现，AGE/RAGE 信号通路的激活与机体                        1.3 细胞
          慢性高血糖环境有关，当该通路受到抑制时，GDM大鼠                               人绒毛膜滋养层细胞系 HTR-8/SVneo 购自美国
          的空腹血糖、空腹胰岛素、高密度脂蛋白水平均可显著                            ATCC细胞库。
          改善，提示AGE/RAGE信号通路在GDM发生发展中具                         2 方法
                    [8]
          有重要作用 。此外，有研究指出，吴茱萸碱可通过调控                           2.1 细胞培养与分组
          AGE/RAGE 信号通路而抑制口腔鳞癌细胞的恶性生物                             将 HTR-8/SVneo 细胞接种于含 10% 胎牛血清、100
          学行为 。基于现有证据，本研究拟在高糖环境下培养                            U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的DMEM培养基（以下
                [9]
          人滋养层细胞HTR-8/SVneo，初步探讨吴茱萸碱对高糖                       简称“DMEM 完全培养基”）中，于 37 ℃、5%CO2条件下
          诱导的滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及潜在机制，                           培养（培养条件下同），每2～3 d换液1次，待细胞生长至
          旨在为GDM的治疗及吴茱萸碱的应用提供参考。                              对数期时进行实验。
          1 材料                                                    将处于对数生长期的 HTR-8/SVneo 细胞分为对照
          1.1 主要仪器                                            组、高糖组、吴茱萸碱低浓度组、吴茱萸碱高浓度组、pc-
              本研究所用主要仪器包括Synergy H1型酶标仪（美                     NC组、pc-RAGE组，每组设置6个复孔。对照组细胞加
          国 BioTek 公 司）、VHX-7000 型 光 学 显 微 镜（日 本              入含 5.5 mmol/L 葡萄糖的 DMEM 完全培养基；高糖组
          KEYENCE 公司）、FACS Calibur 型流式细胞仪（美国                  细胞加入含25 mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基（葡
                                                                                  [10]
                                      ®
          BD Biosciences公司）、ABI Prism  7500型定量实时聚合            萄糖浓度参考相关文献 设置）；吴茱萸碱低、高浓度组
          · 1464 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12                            中国药房  2024年第35卷第12期
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