Page 27 - 《中国药房》2024年12期

min，吸弃染料，用PBS洗涤3次。将玻底小皿水平置于 束整体的入胞速度和入胞量均明显快/多于 PEG-PCL-
激光共聚焦显微镜载物台上，采集选定细胞的明场图 C6胶束。两种胶束入胞0、30 s以及3 min时的激光共聚
像；设定488 nm绿色激发通道和555 nm橙色激发通道， 焦实时显微镜图见图3。
于小皿中加入200 μL的PEG-PCL-C6胶束或7pep-PEG- 15 20
PCL-C6 胶束（用完全培养基稀释，C6 质量浓度为 150 10 15
ng/mL，下同），利用 X-Y-t 程序每隔 3 s 对视野选定区域 分布比例/% 5 分布比例/% 10 5
进行图像采集，持续3 min。 0 0
1 10 100 1 000 10 000 1 10 100 1 000
2.3.2 胶束在HeLa细胞内的分布考察 粒径/nm 粒径/nm
A. PEG-PCL-C6胶束 B. 7pep-PEG-PCL-C6胶束
5
将HeLa细胞以每孔1.0×10 个的密度接种到24孔
图1 两种胶束的粒径检测结果
板中，当细胞密度达 80% 左右时，加入 1 mL 的 PEG-
PCL-C6 胶束或 7pep-PEG-PCL-C6 胶束作为实验组，同
时设置空白对照组（加入 1 mL 完全培养基），分别于细
胞培养箱中孵育 3、5、10、15、30、60 min。孵育结束后，
迅速吸弃上清液，并用冰PBS洗涤细胞3次，加入4%组
织细胞固定液 500 μL 固定细胞，加入含 0.2% 曲拉通 X-
A. PEG-PCL-C6胶束 B. 7pep-PEG-PCL-C6胶束
100 的磷酸缓冲盐溶液（TPBS）透化细胞 5 min，再加入 图2 两种胶束的外观形态显微镜图
含 3%BSA 的 TPBS 溶液，于 37 ℃孵育 1 h。然后，实验
组分别加入用含 1% BSA 的 TPBS 溶液稀释的 Rab5、
Rab11B、Rab7 抗体（稀释比例分别为 1∶100、1∶200、 PEG-PCL-C6胶束

1∶200），空白对照组加入含 1%BSA 的 TPBS 溶液，于
4 ℃下孵育过夜；次日取出细胞，吸弃上清液，用PBS洗
涤细胞3次，加入二抗（稀释比例为1∶200），于37 ℃下孵
育 1 h，吸弃上清液，再用 PBS 洗涤细胞 3 次。通过激光
共聚焦显微镜观察Rab5、Rab11B、Rab7在细胞内的荧光 7pep-PEG-PCL-C6胶束
染色情况，通过共聚焦分析软件计算皮尔森相关系数、
信号重叠比率以及共定位比率来评价胶束与 EE、内吞
循环室（endocytic recycling compartments，ERC）以及 LE 0 s 30 s 3 min
图3 两种胶束入胞的激光共聚焦实时显微镜图
的共定位情况。按照时间先后，每个内吞体设定3个观
测时间。 3.3 胶束在HeLa细胞内的分布情况
2.4 统计学方法 3.3.1 胶束与EE的共定位情况
采用 GraphPad Prism 9.0 软件进行统计分析。每个 7pep-PEG-PCL-C6 胶束在入胞 5、10 min 时与 EE 的
样品至少采集3个不同视野单细胞的数据，结果以平均 皮尔森相关系数、信号重叠比率和共定位比率（入胞 10
值或 x±s 表示，采用双尾 t 检验分析比较同一时间两组 min 时除外）均显著高于 PEG-PCL-C6 胶束（P＜0.05 或
胶束的差异，采用单因素方差分析比较同组胶束不同时 P＜0.01），表明与 PEG-PCL-C6 胶束比较 ，7pep-PEG-
间的差异。检验水准α＝0.05。 PCL-C6胶束能够更快地进入EE。结果见图4和图5。
3 结果 3.3.2 胶束与ERC的共定位情况
3.1 胶束的粒径、PDI及外观形态 PEG-PCL-C6 胶束在入胞 5 min 时与 ERC 的共定位
PEG-PCL-C6胶束和7pep-PEG-PCL-C6胶束的平均 比率最高，而7pep-PEG-PCL-C6胶束在入胞10 min时与
粒径分别为（75.0±2.3）、（82.0±1.5）nm，PDI 分别为 ERC 的共定位比率最高，且入胞 10 min 时 7pep-PEG-
0.17±0.20、0.17±0.32，外观均为规整的圆球形。结果 PCL-C6胶束与ERC的皮尔森相关系数、信号重叠比率、
见图1和图2。 共定位比率均显著高于其入胞 5 min 时（P＜0.01）。在
3.2 细胞对胶束的实时摄取情况 考察时间范围内，入胞5 min时，7pep-PEG-PCL-C6胶束
PEG-PCL-C6胶束和7pep-PEG-PCL-C6胶束在考察 的皮尔森相关系数、信号重叠比率、共定位比率均显著
时间段内均有明显的入胞行为。7pep-PEG-PCL-C6 胶 低于PEG-PCL-C6胶束（P＜0.01）。结果见图6和图7。

中国药房 2024年第35卷第12期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 12 · 1433 ·