Page 32 - 《中国药房》2024年12期
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动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种慢性且不               kin-1β，IL-1β）、IL-18 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测
          断进展的炎症性疾病，是引发心血管事件的主要原因之                            试剂盒（批号分别为 ml095490、YJ961775、YJ256639、
          一，因此防治 AS 的发生发展具有十分重要的意义。核                          YJ149752、YJ112055、YJ301814、YJ002294）均购自东莞
          因子 κB（nuclear factor κB，NF-κB）可通过激活 NOD 样           市酶联生物科技有限公司；实时荧光定量 PCR 试剂盒、
          受体热蛋白结构域相关蛋白 3（NOD-like receptor ther‐              反转录试剂盒和 β-肌动蛋白（β-actin）一抗（批号分别为
          mal protein domain associated protein 3，NLRP3）诱导细   CW3008、CW2019、CW0096）均购自北京康为世纪生物
                [1]
          胞焦亡 。细胞焦亡是细胞的一种程序性死亡方式，其                            科技有限公司；兔抗小鼠 NLRP3、消皮素 D（gasdermin
                                                        [2]
          以质膜破坏为特征，并可释放细胞内物质和促炎因子 。                           D，GSDMD）、NF-κB、胱天蛋白酶 1（Caspase-1）、NF-κB
          在 AS 的发展中，细胞焦亡的发生会引起大量炎症因子                          抑制蛋白（inhibitor of NF-κB，IκB）、IL-1β、IL-18 一抗
          的累积，进而破坏血管壁的结构，最终引起斑块的破裂                           （批 号 分 别 为 19771-1-Ap、20770-1-Ap、80979-1-RR、
                                   [3]
          出血，导致严重的心血管事件 。                                     22915-1-Ap、10268-1-Ap、26048-1-Ap、10663-1-Ap）均购
              中医学认为，痰浊、血瘀是 AS 发生的主要病因，脾                       自武汉三鹰生物技术有限公司；兔抗小鼠凋亡相关斑点
          失健运、痰瘀互结是其关键病机，临床应用具有健脾、祛
                                                              样蛋白质（apoptosis-associated speck-like protein contai-
                                                [4]
          痰、化瘀功效的药物治疗AS的疗效颇为显著 。杨关林
                                                              ning  CARD，ASC）一 抗（批 号 HY-P80548）购 自 美 国
          教授基于以脾论治的学术思想，研制了化瘀祛痰方（专
                                                              MedChemExpress 公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔
          利号 ZL200710010845.9），该方可明显改善冠心病患者
                                                              IgG二抗（批号CW0103）购自江苏康为世纪生物科技股
          的 临 床 症 状    [5―6] 。 环 氧 二 十 碳 三 烯 酸（epoxyei-
                                                              份有限公司；总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯
          cosatrienoic acids，EETs）是花生四烯酸的代谢产物，包括
                                                             （triglyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density
          5，6-EET、8，9-EET、11，12-EET、14，15-EET 4 种活性形
                                                              lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇
          式，可通过抑制NF-κB活性、减轻炎症反应来发挥抗AS
                                                             （low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）检测试剂盒
              [7]
          作用 。本课题组前期研究发现，冠心病患者体内的
                                                             （批 号 分 别 为 CH0103152、CH0105151、CH0105161、
          EETs 水平有所降低，而化瘀祛痰方可提高 EETs 水
                                                              CH0105162）均购自四川迈克生物科技股份有限公司；
          平 [8―9] 。基于此，本研究以EETs介导细胞焦亡为切入点，
                                                              苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（批号 MB9898-Jun-11G）
          探讨化瘀祛痰方对小鼠 AS 的影响及作用机制，旨在为
                                                              购自大连美仑生物科技有限公司；油红 O 染色试剂盒
          深入筛选有效的抗AS方剂提供参考。
                                                             （批号 052521210730）购自北京碧云天生物科技有限
          1 材料
                                                              公司。
          1.1 主要仪器
                                                              1.3 实验动物及饲料
              本研究所用主要仪器包括 7180 型全自动生化分析
                                                                  6～8 周龄 SPF 级 ApoE  －/－ 小鼠 30 只，具有相同遗传
          仪（日本 HITACHI 公司），7500 型实时荧光定量聚合酶
                                                              背景的C57BL/6J同龄野生型小鼠10只，体质量为（20±
          链式反应（PCR）仪（美国 Applied Biosystems 公司），EM
                                                              2）g，均购自北京华阜康生物科技股份有限公司，动物生
          UC7 型超薄切片机（德国 Leica公司），C1 型正置白光显
                                                              产许可证号 SCXK（京）2019-0008。小鼠在辽宁中医药
          微镜（日本 Nikon 公司），1658001 型垂直电泳槽、Power‐
                                                              大学SPF级实验动物中心饲养（相对湿度40%～50%，室
          Pac Basic 型电泳仪（美国 Bio-Rad 公司），5200 型全自动
                                                              温21～23 ℃），自由饮食。本研究方案经辽宁中医药大
          化学发光图像分析系统（上海天能科技有限公司），
                                                              学 动 物 实 验 伦 理 委 员 会 审 批 通 过 ，批 件 号 为
          51119180 型 酶 标 仪（美 国 Thermo  Fisher  Scientific 公
          司）等。                                                21000042021072。高脂饲料（胆固醇 0.15%，脂肪 21%）
          1.2 主要药品与试剂                                         购自小黍有泰（北京）生物科技有限公司，批号为 2018-
              绞股蓝、黄芪、党参、川芎、石菖蒲、茯苓、丹参、法半                       0006。
          夏、郁金饮片（批号分别为2203212、2110272、212220303、              2 方法
          2203201、2103252、2111071、2202071、2203107、2201233）    2.1 化瘀祛痰方水煎剂的制备
          均购自辽宁中医药大学附属医院，由该院中药师鉴定均                                取绞股蓝30 g、黄芪30 g、党参30 g、川芎20 g、石菖
          符合2020年版《中国药典》的相关要求；瑞舒伐他汀钙片                         蒲 20 g、茯苓 15 g、丹参 15 g、法半夏 15 g、郁金 15 g，混
         （阳性对照药，批号 99201103，规格 5 mg）购自鲁南贝特                    合后加入 10 倍量水浸泡 1 h 后，武火煮沸，文火煮 20
          制药有限公司；BCA 蛋白定量试剂盒和 5，6-EET、8，9-                    min，过滤，重复 3 次，合并滤液，浓缩成质量浓度为 1.2
          EET、11，12-EET、14，15-EET、白细胞介素 1β（interleu‐          g/mL的溶液（以生药量计），冷却后于4 ℃保存备用。


          · 1438 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12                            中国药房  2024年第35卷第12期
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