Page 57 - 《中国药房》2024年11期
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[3]
          管上皮细胞炎性损伤 ；可通过减轻肾组织氧化应激和                           1.3 动物
                                            [4]
          细胞凋亡来改善顺铂诱导的急性肾损伤 。以上研究表                               本研究所用动物为 SPF 级雄性 SD 大鼠，共 81 只，
          明，薯蓣皂苷具有抗炎、抗氧化和保护肾脏的作用。既                           9～10周龄，体重348～366 g，购自成都达硕实验动物有
          往研究表明，薯蓣皂苷能够通过抑制海马组织促炎因子                           限公司[生产许可证号：SCXK（川）2021-004]。购入后，
                                        [5]
          释放来减轻脓毒症小鼠的神经炎症 ，故本研究推测薯                           大鼠饲养于我院动物实验房内，环境温度（25±0.5） ℃，
          蓣皂苷可能通过抑制炎症来缓解脓毒症肾损伤。                              相对湿度（50±5）%，12 h 光/12 h 暗循环。本研究通过
              核因子 E2 相关因子 2（nuclear factor E2-related fac‐   了我院伦理委员会批准（审批号：JCLS2023第41号）。
          tor 2，Nrf2）/血红素加氧酶 1（heme oxygenase-1，HO-1）        2 方法
          信号通路具有调节细胞氧化-抗氧化、炎症反应等多种                           2.1 动物造模及分组、给药
                                                                             [8]
                                                  [6]
          生物活性，是机体内调节氧化应激的关键途径 。据报                               参照相关文献 ，采用盲肠结扎和穿刺法构建脓毒
          道，激活 Nrf2/HO-1 信号通路可抑制 NOD 样受体蛋白 3                 症大鼠模型：腹腔注射 1% 戊巴比妥钠（0.04 g/kg）麻醉
         （NOD-like receptor protein 3，NLRP3）表达，从而缓解胰         大鼠，在其前腹部正中切口3 cm，露出盲肠，将粪便拖至
                        [7]
          腺炎相关肺损伤 。基于此，本研究以盲肠结扎和穿刺                           盲肠处，用5/0丙烯线结扎，18号针头穿刺盲肠10次，稍
          法建立脓毒症大鼠模型，并从 Nrf2/HO-1 信号通路出发                     微挤压滴出一小滴粪便，将盲肠重新置于腹腔中，逐层
          探究薯蓣皂苷对脓毒症大鼠肾损伤的影响及可能机制，                           缝合伤口。若大鼠在术后3 h出现蜷缩懒动、寒战竖毛、
          以期为薯蓣皂苷应用于临床治疗脓毒症及相关肾损伤                            精神萎靡、进食减少、呼吸急促、保护性反射减弱、眼角
                                                                                           [9]
          提供参考。                                              分泌物增多等情况，说明造模成功 。造模过程中，有 9
          1 材料                                               只大鼠死亡。将造模后存活的 60 只大鼠按照随机数字
                                                             表法分为模型组，薯蓣皂苷低、中、高剂量组和地塞米松
          1.1 主要仪器
                                                             组，每组12只。另取12只大鼠除不用丙烯线结扎、针头
              HCC300型全自动生化分析仪、Sense型酶标仪均购
                                                             穿刺外，进行相同实验操作，作为假手术组。
          自上海堃择实业有限公司；B302型光学显微镜购自上海
                                                                 造模15 min后，薯蓣皂苷低、中、高剂量组大鼠分别
          普赫光电科技有限公司；QIAxpert 型分光光度计、KST-
                                                             尾静脉注射 30、60、120 mg/kg 薯蓣皂苷（用 0.5%CMC-
          6000 型凝胶成像分析系统均购自上海金鹏分析仪器有
                                                             Na 溶液稀释成质量浓度分别为 3、6、12 mg/mL 的溶液，
          限公司。
                                                                      [10]
                                                             现配现用） ，地塞米松组大鼠尾静脉注射 10 mg/kg 地
          1.2 主要药品与试剂
                                                             塞米松（用0.5%CMC-Na溶液稀释成质量浓度为1 mg/mL
              薯蓣皂苷原料药（批号 YS-U-0701，纯度 98%）购自
                                                                    [8]
                                                             的溶液） ，注射体积均为10 mL/kg；假手术组、模型组大
          美国Sigma公司；地塞米松注射液（阳性对照药物，批号
                                                             鼠尾静脉注射10 mL/kg的0.5%CMC-Na溶液。
          20220116，规格 5 mg/支）购自郑州卓峰制药有限公司；
                                                             2.2 样本收集
          羧甲基纤维素钠（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-
                                                                 给药后24 h，对大鼠心脏穿刺取血，室温静置2 h，以
          Na）溶液、BCA蛋白检测试剂盒（批号分别为MK-2823、
                                                             3 000 r/min 离心 10 min，收集上层血清，置于－20 ℃冰
          MK-30116）均购自上海麦克林生化科技股份有限公司；
                                                             箱中保存，备用；取血后，脱颈椎处死大鼠，快速取出肾
          中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelati‐
                                                             组织，将左肾用10%甲醛固定，右肾保存于－80 ℃冰箱
          nase associated lipocalin，NGAL）、肾损伤分子 1（kidney
                                                             中备用。
          injury molecule-1，KIM-1）、白细胞介素 6（interleukin-6，
                                                             2.3 血清中肌酐、尿素氮、NGAL、KIM-1、IL-6、IL-1β、
          IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，      TNF-α水平检测
          TNF-α）酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒以及兔源                           取出血清，以全自动生化分析仪检测血清中肌酐
          Nrf2、HO-1、NLRP3、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceralde‐           （creatinine，Cr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）水
          hyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）一抗和辣根         平，采用 ELISA 法以酶标仪检测血清中 NGAL、KIM-1、
          过 氧 化 物 酶 标 记 的 羊 抗 兔 IgG 二 抗（批 号 分 别 为            IL-6、IL-1β、TNF-α水平。
          Y223258、 Y234370、 Y119623、 Y255439、 Y236738、       2.4 肾组织病理形态学观察
          Y233432、Y141443、Y137568、Y263823、Y243789）均购             取固定于10%甲醛中的左肾组织适量，常规石蜡包
          自上海翌圣生物科技股份有限公司；苏木精-伊红（HE）                         埋、切片（厚6 µm），行HE染色、二甲苯透明、封片后，在
          染色试剂盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂                 光学显微镜下观察肾组织病理形态学变化并拍照。
          盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）检测试             2.5 肾组织中MDA水平、SOD活性检测
          剂 盒 和 RIPA 蛋 白 裂 解 液（批 号 分 别 为 D983478、                取冻存的右肾组织约30 mg，解冻后制备组织匀浆，
          D234482、D498347、D239844）均购自上海帛龙生物科技                分别采用硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法以分光
          有限公司。                                              光度计检测肾组织中MDA水平和SOD活性。


          中国药房  2024年第35卷第11期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 11    · 1335 ·
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