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3.7 桃红四物汤加味颗粒对 DKD 模型大鼠肾组织中                         明显改善，同时该颗粒从第8周开始即具有降低UTP的
          TGF-β1、Col-ⅣⅣ mRNA和蛋白表达的影响                          作用，能减轻模型大鼠肾组织病理损伤，改善肾功能，但
              与正常组比较，模型组大鼠肾组织中 Col-Ⅳ、TGF-                     对大鼠血糖无改善作用，提示该颗粒具有肾保护作用。
          β1 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）。与                          DKD进展至ESKD的早期标志是蛋白尿的发生，而
          模型组比较，厄贝沙坦组和桃红四物汤加味组大鼠肾组                            病程一旦进展至大量蛋白尿及肾功能衰竭，则肾脏损伤
          织中Col-Ⅳ、TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降                     往往呈现不可逆的发展，因此治疗早期蛋白尿对于DKD
          低（P＜0.05），而厄贝沙坦组与桃红四物汤加味组比较
                                                              整个病程的控制具有重要意义。肾小球滤过屏障结构
          差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见图4、表6。
                                                              及功能的改变是蛋白尿产生的重要病理基础，而足细胞
              β-actin                             43 kDa      作为滤过屏障的最外层部分，对于维持肾小球的完整性
                                                              至关重要 。EMT作为足细胞损伤的一种表现形式，是
                                                                      [7]
                                                  44 kDa
                                                              指足细胞失去其标志性的表型特征，转化为具有间充质
              TGF-β 1
                                                              表型细胞的过程，伴随细胞形态的改变和细胞功能的缺
              Col-Ⅳ                               130 kDa
                                                              失。研究表明，蛋白尿的发生明显早于足细胞脱落，而
                    正常组     模型组   厄贝沙坦组    桃红四物汤
                                            加味组               EMT是足细胞脱落和凋亡前的一个可逆过程，因此抑制
           图4 大鼠肾组织中TGF-β1、Col-ⅣⅣ蛋白表达的电泳图
                                                                                                       [14]
                                                              EMT 能 在 一 定 程 度 上 控 制 蛋 白 尿 的 漏 出 。 P-
          表6 各组大鼠肾组织中Col-ⅣⅣ、TGF-β1 mRNA和蛋白                    cadherin、nephrin均是足细胞裂孔膜的标志蛋白，而WT1
               检测结果（x±s，n＝8）
                                                              只表达于足细胞核，是成熟足细胞的特异性标志蛋
                                                                [15]
           组别              TGF-β 1             Col-Ⅳ          白 。本研究结果显示，与正常组比较，模型组大鼠肾
                       mRNA      蛋白       mRNA      蛋白
           正常组        1.00±0.11  0.22±0.03  1.00±0.08  0.14±0.03  组织中P-cadherin、nephrin mRNA表达水平均降低、蛋白
           模型组        2.51±0.35 a  0.64±0.12 a  1.98±0.28 a  0.53±0.05 a  沉积均减少，而间充质细胞表型标志物 α-SMA mRNA
           厄贝沙坦组      1.67±0.38 b  0.34±0.06 b  1.22±0.24 b  0.27±0.03 b  表达水平升高、蛋白沉积增多；经桃红四物汤加味颗粒
           桃红四物汤加味组   1.52±0.29 b  0.30±0.05 b  1.28±0.19 b  0.21±0.03 b
                                                              干预后，模型大鼠肾组织中P-cadherin、nephrin mRNA表
             a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
                                                              达水平均升高、蛋白沉积均增加，α-SMA mRNA 表达水
          4 讨论
                                                              平降低、蛋白沉积均减少，提示DKD模型大鼠存在足细
              DKD是DM病程日久、累及肾脏而出现的慢性微血
                                                              胞EMT过程，而桃红四物汤加味颗粒能抑制EMT过程。
          管病变，早期仅表现为间歇性微量白蛋白尿或转铁蛋白
                                                              此外，笔者通过电子显微镜及WT1标记足细胞的方法，
          尿，随着病程进展，微量蛋白尿逐渐转变为持续性蛋白
                                                              观察到模型组大鼠足细胞足突弥漫融合、肾小球基底膜
          尿，甚至肾功能衰竭，是引起 ESKD 的重要原因。DKD                        增厚，WT1 标记的足细胞明显减少；而经桃红四物汤加
          主要的病理表现为肾小球体积肥大、肾小球基底膜弥漫                            味颗粒干预后，足细胞在形态及数量上均有改善，同时
          性增厚、系膜基质增生、Kimmelstiel-Wilson结节形成，最                 肾小球基底膜厚度亦有改善，表明该颗粒能改善 DKD
                                         [13]
          终出现肾小球硬化及肾间质纤维化 。本研究结果显                             模型大鼠肾组织病理损伤，减轻足细胞损伤。
          示，与正常组比较，模型组大鼠24 h UTP显著升高，肾组                           DKD进展至ESKD的最终病理表现是肾脏纤维化。
          织出现明显的DKD病理表现，提示DKD建模成功。                            肾脏纤维化是以肾小管及肾脏毛细血管结构变性及丧
             《圣济总录》云“消渴病久，肾气受伤……”，《临证指                        失、细胞外基质大量积聚为特征的病理表现。随着肾间
          南医案》载“大凡经主气，络主血，久病血瘀”，由此可见，                         质纤维化的加重，肾功能逐渐丧失，因此延缓肾脏纤维
          DKD 是在 DM 病久及肾、耗气伤阴基础上瘀血内停，阻                        化进展是治疗DKD的关键。TGF-β1是一种重要的致纤
          于肾络，导致肾络瘀阻所致。基于此，本研究以桃红四                            维化因子，其活化可以诱导肌成纤维细胞增殖，导致胶
          物汤加味颗粒对 DKD 模型大鼠进行干预，方中熟地黄                          原纤维在肾组织间大量堆积，进一步加重肾脏纤维化进
          滋阴补肾填精、当归补血活血、白芍柔肝养血，三药合用                           展 。Col-Ⅳ是细胞外基质的主要胶原成分，α-SMA 是
                                                                [16]
          加强补血养血之效；川芎行气理血，为“血中气药”，助当                          肌纤维细胞表达的特征蛋白，两者在肾脏中的表达水平
          归活血祛瘀；桃仁、红花均为破血之品，合用加强活血祛                           升高均能直接反映肾脏纤维化程度 。本研究结果显
                                                                                             [17]
          瘀之效；然络脉瘀结多病根深伏，非一般草木之力能疏，                           示，与正常组比较，模型组大鼠肾组织中可见胶原纤维
          故本研究加入僵蚕、地龙以疏通肾络瘀阻。全方合用可                            在肾小球及肾间质沉积较多，TGF-β1、Col-Ⅳ及 α-SMA
          滋阴、补肾、活血、行气、通络，正中 DKD 肾络瘀阻的基                        在肾组织中的表达上调；经桃红四物汤加味颗粒干预
          本病机。本研究结果显示，与模型组比较，经桃红四物                            后，大鼠肾组织中胶原纤维沉积减少，TGF-β1、Col-Ⅳ及
          汤加味颗粒干预后，模型大鼠消瘦、多饮、多尿的症状均                           α-SMA表达下调，表明该颗粒能有效减轻肾脏纤维化进


          · 1332 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 11                            中国药房  2024年第35卷第11期
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