Page 50 - 《中国药房》2024年11期
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can inhibit the EMT of podocyte in DKD model rats, and alleviate renal pathological damage and podocyte damage, thus
protecting renal function, and delaying the process of renal fibrosis.
KEYWORDS diabetic kidney disease; Taohong siwu decoction modified granules; renal fibrosis; podocyte; epithelial-
mesenchymal-transition
糖尿病(diabetes mellitus,DM)作为最常见的代谢 1.2 主要药品与试剂
性疾病,其发病率逐年增高,据估计到2030年,全球将有 桃红四物汤加味颗粒由桃仁 10 g、红花 10 g、当归
6.43 亿人患有 DM,约高达 35% 的 DM 患者会出现糖尿 12 g、熟地黄 10 g、川芎 10 g、白芍 10 g、地龙 10 g、僵蚕
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病 肾 病(diabetic kidney disease,DKD) 。 在 我 国 , 10 g 组 成 ,均 为 配 方 颗 粒(批 号 分 别 为 21092651、
DKD 已成为中老年人患终末期肾病(end-stage kidney 20192723、21092822、21101963、21103132、21093011、
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disease,ESKD)的首要原因 。DKD 以持续进展性蛋白 21080244、21080432),均购自神威药业集团有限公司;
尿及进行性肾功能受损为主要临床表现,其病理特征为 厄贝沙坦片(规格0.15 g/片,批号4A293)购自赛诺菲(杭
肾小球硬化及肾间质纤维化,蛋白尿不仅是 DKD 的主 州)制药有限公司;链脲佐菌素(批号 04081408)购自美
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要表现亦是其病程进展的独立危险因素 ,因此积极控 国 Enzo 公司;TRIquick Reagent 总 RNA 提取试剂(批号
制蛋白尿是治疗DKD的关键。足细胞是肾小球滤过屏 R1100)购自北京索莱宝科技有限公司;FastQuant cDNA
障的重要组成部分,其损伤及脱落可直接影响蛋白尿的 第一链合成试剂盒(批号KR202)购自天根生化科技(北
漏出及肾小球的硬化 [5―6] ,且其也是肾小球中唯一一种 京)有限公司;Platinum SYBR Green qPCR SuperMix-
高度终末分化的细胞,一旦脱落将不可再生。足细胞上 UDG(批号 11733046)购自美国 Invitrogen 公司;脑脊液
皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal-transition,EMT) 与尿蛋白测定试剂盒(批号2400134)购自北京利德曼生
是足细胞损伤的早期事件,抑制 EMT 进展可减轻足细 化股份有限公司;兔β-肌动蛋白(β-actin)多克隆抗体(批
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胞损伤 。有研究表明,DKD患者在高血糖等各种危险 号19086)购自生工生物工程(上海)股份有限公司;小鼠
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因素的刺激下可出现足细胞 EMT ,因此抑制足细胞 P-钙黏素(P-cadherin)多克隆抗体(批号GR211713-5)购
EMT对减轻DKD所致的肾损伤具有重要意义。 自英国 Abcam 公司;兔足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)、α-
DKD中医证候包括浮肿、气短乏力、腰膝酸软、口干 平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅳ型
舌燥、五心烦热、双目干涩、多食易饥、头晕耳鸣、尿沫增 胶原蛋白(type Ⅳ collagen,Col-Ⅳ)多克隆抗体(批号分
多等,还伴有血瘀的表现。中医学认为,瘀血阻于肾络, 别为15060320、15060220、15060232)均购自沈阳万类生
微型癥瘕结于肾络,致肾体受损、肾用失司、封藏不固、 物 科 技 有 限 公 司 ;兔 转 化 生 长 因 子 β1 (transforming
精微外泄,是 DKD 的核心病机 [9―10] ,故当以活血化瘀通 growth factor-β1,TGF-β1 )多克隆抗体(批号BS91338)购
络为DKD的治疗大法。桃红四物汤由当归、熟地黄、红 自美国 Bioworld Technology 公司;兔肾母细胞瘤蛋白 1
花、白芍、桃仁及川芎组成,具有活血祛瘀、养血调经的 (Wilms’ tumor gene 1,WT1)多克隆抗体(批号 A2446)
功效。因为DKD的病程日久,久病入络,故本研究在桃 购自美国ABclonal公司;辣根过氧化物酶标记的山羊抗
红四物汤基础上加入了地龙、僵蚕,借其血肉之质增强 兔免疫球蛋白 G 二抗(批号 GB23303)购自武汉赛维尔
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通络之力 。本研究以DKD模型大鼠为研究对象,探讨 生物科技有限公司;超敏 ECL 化学发光试剂盒(批号
桃红四物汤加味颗粒对足细胞EMT及肾脏纤维化的影 P0018S)购自上海碧云天生物技术有限公司。
响,以期为DKD的临床治疗提供参考。 1.3 动物
1 材料 本研究所用动物为清洁级雄性SD大鼠,共40只,体
1.1 主要仪器 重(100±20)g,购自河北医科大学实验动物中心,动物
本研究所用主要仪器有稳豪型血糖仪[强生(中国) 生产许可证号为SCXK(冀)2018-1-004。实验动物饲养
医疗器材有限公司],7600-020型全自动生化分析仪、H- 于12 h 明暗交替、温度(24±2) ℃、相对湿度(50±10)%
7650 型透射电子显微镜(日本 Hitachi 公司),Nano‐ 的环境中,自由进食饮水。本实验由河北医科大学实验
Drop2000C型紫外分光光度计(美国Thermo Fisher Scien- 动物福利伦理委员会批准,批号为DW2019001。
tific公司),Eco型实时定量聚合酶链式反应(PCR)仪(美 2 方法
国Illumina公司),BX63+DP72型正置研究级显微镜(日 2.1 建模、分组和给药
本 Olympus 公司),MICROM-340E 型石蜡切片机(德国 大鼠适应性饲养1周后,随机选取8只为正常组,给
Zeiss 公司),EMUC7 型超薄切片机(德国 Leica 公司), 予普通饲料饲养;剩余32只为造模组,给予高糖高脂饲
Odyssey型红外激光扫描仪(美国LI-COR公司)等。 料饲养,饲养6周后造模:大鼠禁食不禁水12 h后,按35
· 1328 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 11 中国药房 2024年第35卷第11期