Page 51 - 《中国药房》2024年9期

比例为1∶5 000）室温下孵育2 h，TBST洗膜3次；成像系
统曝光显影、拍照。采用 PhotoShop 整理去色，采用 Al‐
pha 软件计算各条带的灰度值，以目的蛋白灰度值与内
参β-actin蛋白灰度值的比值表示目的蛋白的表达水平。
2.7 统计学处理
采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资
20 μm 20 μm
料满足正态分布以x±s表示，多组间比较采用单因素方 A.空白组 B.模型组
差分析，组间进一步两两比较采用 LSD-t 检验。检验水
准α＝0.05。蛋白质组学通过差异倍数和P值筛选组间
差异蛋白。差异分析采用Student’s t检验，双尾检验，上
调差异倍数 1.20，下调差异倍数 0.83。蛋白质组学中的
P＜0.05表示蛋白表达有差异。
3 结果 20 μm
3.1 丹参饮对大鼠血脂水平的影响 C.丹参饮组
注：黄色箭头代表正常肝血窦，蓝色箭头代表结缔组织增生，红色
实验过程中因操作不当每组大鼠有脱落，但例数仍
箭头代表脂肪滴改变。
满足统计学要求。与空白组比较，模型组大鼠血浆TC、 图1 各组大鼠肝脏组织病理形态显微图（HE染色，×400）
TG、LDL-C 水平均显著升高（P＜0.05），血浆 HDL-C 水
Marker 1 2 3 4 5 6 7 8 9
平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，丹参饮组大鼠 180 kDa
130 kDa
血浆 TC、TG、LDL-C 水平均显著降低（P＜0.05），血浆 100 kDa
HDL-C水平显著升高（P＜0.05）。结果见表1。 70 kDa
表1 各组大鼠血脂水平比较（x±s） 55 kDa
组别 例数 TC/（mmol/L） TG/（mmol/L） HDL-C/（μmmol/L） LDL-C/（μmmol/L） 40 kDa
空白组 9 1.62±0.36 0.34±0.12 1.08±0.15 0.66±0.14
模型组 8 2.43±0.72 a 0.47±0.16 a 0.89±0.17 a 0.84±0.21 a 35 kDa
丹参饮组 9 1.67±0.54 b 0.30±0.10 b 1.05±0.14 b 0.67±0.13 b
25 kDa
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
3.2 丹参饮对大鼠肝脏组织病理形态的影响 15 kDa
10 kDa
HE染色结果显示，空白组大鼠肝脏组织染色均匀， 注：1～9表示9个样本。
细胞质、细胞核清晰，肝板呈放射状排列，肝血窦间隙排 图2 9个样本的SDS-PAGE电泳图
列清晰，未见变性和炎症细胞浸润。模型组大鼠肝脏组
低表达水平，并与EPHX2在蛋白功能上存在一定联系。
织染色不均，肝板排列紊乱，肝血窦消失，部分细胞的细
丹参饮组和模型组样本共筛选出显著差异表达蛋白139
胞核固缩或消失，细胞质肿胀、融合，结缔组织增生，呈
个，相对表达水平显著升高的蛋白数目为47个，相对表
现弥散性空泡样脂肪滴改变。与模型组比较，丹参饮组
达水平显著降低的蛋白数目为 92 个。其中 PLIN2 差异
大鼠肝脏组织上述病理形态均有不同程度的改善。结
倍数为0.41倍，是较为显著的差异蛋白，参与PPAR信号
果见图1。
通路，是脂质类代谢的关键信号调节通路；GSK-3β差异
3.3 TMT定量蛋白质组学分析结果
倍数为1.9倍，也是较为显著的差异蛋白，其参与调节糖
3.3.1 样本质控分析结果
脂代谢。结果见图3。上述差异蛋白均为表达差异倍数
电泳结果显示，9个样本电泳图相对清晰，无拖尾现
较为显著的差异蛋白，因此，选择 EPHX2、PLIN2、GSK-
象，组内条带相对稳定，可用于后续实验研究。根据峰
形和时间每组共收取 20 个馏分，合并成 10 个馏分。结 3β、PPARγ进行后续试验验证。
果见图2。 3.4 大鼠肝脏组织中EPHX2、PLIN2、GSK-3β、PPARγ
3.3.2 差异蛋白分析结果 蛋白表达结果
搜库鉴定结果共鉴定蛋白5 866个。波峰分析结果 与空白组比较，模型组大鼠肝脏组织中 EPHX2、
显示，模型组和空白组样本间共筛选出显著差异表达蛋 PLIN2 蛋白表达水平均显著升高（P＜0.01），GSK-3β、
白298个，相对表达水平显著升高的蛋白数目为151个， PPARγ蛋白表达水平均显著降低（P＜0.01）。与模型组
相对表达水平显著降低的蛋白数目为 147 个。其中， 比较，丹参饮组大鼠肝脏组织中 EPHX2、PLIN2 蛋白表
EPHX2差异倍数为2.5倍，是最显著的差异蛋白；差异蛋 达水平均显著降低（P＜0.01），GSK-3β、PPARγ 蛋白表
白环加氧酶 1（cyclooxygenase 1，COX1）、COX2 均处于 达水平均显著升高（P＜0.01）。结果见图4、图5。

中国药房 2024年第35卷第9期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 9 · 1073 ·