Page 49 - 《中国药房》2024年9期

improvement in the above pathological and morphological. The results of differential protein analysis showed that the total number
of differential proteins was 298 between the model group and the blank group； the total number of differential proteins was 139
between the model group and Danshen decoction group. Compared with the model group， the expression levels of EPHX2 and
PLIN2 proteins in the liver tissue of rats in the Danshen decoction group were significantly reduced （P＜0.01）， while the
expression levels of GSK-3β and PPARγ were significantly increased （P＜0.01）. CONCLUSIONS Danshen decoction has a
significant improvement effect on the plasma lipid levels and the pathological and morphological of the liver tissue in
hyperlipidemia model rats. Its regulatory mechanism may be related to the up-regulation of PPARγ and GSK-3β expression and
down-regulation of EPHX2 and PLIN2 expression， and the signaling pathways involved may include PPAR-γ signal pathway.
KEYWORDS hyperlipidemia； Danshen decoction； proteomics； differential protein； peroxisome proliferator activated receptor γ；
glycogen synthase kinase-3β

高脂血症是一种体内脂质代谢紊乱性疾病，临床表 1.2 主要药品与试剂
现为血浆甘油三酯（triglyceride，TG）、胆固醇（total cho‐ 丹参饮水煎液由实验室自制。处方组成为《时方歌
lesterol，TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipopro‐ 括》中原方用量：丹参30 g，檀香3 g，砂仁3 g。以上3味
tein cholesterol，LDL-C）升高和高密度脂蛋白胆固醇 中药饮片均购自哈尔滨市道外区新安康药材站，产地分
[1]
（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）降低 。我 别为山东、云南、广东，批号分别为 210301、210502、
国成年血脂异常者超过 2 亿人，是心脑血管病易发人 210101，经黑龙江中医药大学田明教授鉴定，所有饮片
群 [1—2] 。因此，对高脂血症的发病机制和治疗机制进行 均符合2020年版《中国药典》标准。煎煮工艺：以上处方
研究具有重要的社会意义。 组成按比例扩大5倍，药材用8倍量（mL/g）水浸泡0.5 h
丹参饮是治疗气滞血瘀证的经典方剂，具有活血化 后，冷凝回流提取2次，合并煎煮液，浓缩煎煮液，最终煎
瘀、行气止痛之功。临床和基础实验研究发现，丹参饮 液含生药质量浓度为0.36 g/mL。
加减服用月余可明显降低临床患者血清 TG、TC 水平， TC、TG、LDL-C、HDL-C 试 剂 盒（批 号 分 别 为
212027、218061、221651、221751）均购自中生北控生物
亦可显著降低高脂饲料和高脂乳剂诱导的高脂血症模
科技股份有限公司；氨水、四乙基溴化铵（tetraethylam‐
型大鼠血浆 TC、TG、LDL-C 水平 [3—4] 。本课题组前期基
monium bromide，TEAB）缓冲液、碘乙酰胺（批号或货号
础研究及以往多项研究均证实，丹参饮可以有效改善血
分别为 P1210525、BCBR4372V、P1806457）均购自德国
脂水平 [5—8] 。高脂血症的发生、发展机制极为复杂，但是
Sigma 公司；改良胰蛋白酶（货号 409668）购自美国 Pro‐
脂质代谢的相关酶、脂质转运的相关蛋白具有表达相对
mega 公司；十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，
稳定、可被检测等特征，且肝脏是脂质代谢的重要器官。
SDS）、丙酮（批号分别为21190409、21201202）均购自国
本研究拟通过对高脂血症模型大鼠肝脏进行蛋白质组
TM
药集团上海有限公司；TMT 10Plex 标记试剂、蛋白酶
学研究，从蛋白质表达谱角度解读丹参饮治疗高脂血症
抑制剂混合物、预染蛋白、乙腈、甲醇、甲酸、去离子水、
的靶点蛋白，以期明确丹参饮对高脂血症模型大鼠血脂
BCA 蛋白检测试剂盒、三（2-羧乙基）膦盐酸盐|[tri（2-
异常的调节机制。
carboxyethyl）phosphine hydrochloride，TCEP]溶液、预制
1 材料
聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophore‐
1.1 主要仪器与软件
sis，PAGE）凝胶（批号或货号分别为VL320580、410069、
本研究使用的主要仪器与软件有：C18反相色谱柱、 983063、211448、213511、215715、210416、UI289351、
S-3500RS 型 色 谱 仪 、Q-Exactive Plus 型 质 谱 仪 、Van‐
VG305342、21121170）均购自美国 Thermo Fisher Scien‐
quish Flex 型二元超高效液相色谱（UPLC）仪、Xcalibur tific 公司；兔源环氧化物水解酶 2（epoxide hydrolase 2，
4.0 数据采集软件（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）， EPHX2）多克隆抗体、兔源围脂滴蛋白 2（perilipin 2，
ACQUITY UPLC BEH C18 色谱柱（美国 Waters 公司），
PLIN2）重组抗体、兔源过氧化物酶体增殖物激活受体γ
TGL-16G型台式高速离心机（苏州捷美电子有限公司）， （peroxisome proliferator activated receptor γ，PPARγ）多
7600-020型全自动生化分析仪（日本株式会社日立高新 克隆抗体、兔源糖原合酶激酶 3β（glycogen synthase
技术公司），BX43 型光学显微镜（日本 Olympus 公司）， kinase-3β，GSK-3β）多克隆抗体、β-肌动蛋白（β-actin）多
LE204E 型分析天平（瑞士 Mettler Toledo 公司），iMARK 克隆抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔 IgG
型酶标仪（美国 Bio-Rad 公司），DYY-7C 型电泳仪、WD- （货 号 分 别 为 bs-3880R、bsm-54764R、bs-0530R、bs-
9413B型凝胶成像分析系统、DYCZ-40D型转移槽（北京 0028R、bs-0061R、bs-0295G）均购自北京博奥森生物技
六一生物科技有限公司）。 术有限公司。

中国药房 2024年第35卷第9期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 9 · 1071 ·