Page 44 - 《中国药房》2024年9期

进行在线质量校正。脱溶剂气温度和离子源温度分别 表2 各组大鼠T3、T4、FT3、FT4和TSH的检测结果（x±s，
为350.0、110.0 ℃；脱溶剂气流量为750.0 L/h；毛细管电 n＝10）
－
+
压分别为1 300.0 V（ESI）和1 500.0 V（ESI ）；锥孔电压 组别 T 3/（ng/mL） T 4/（ng/mL） FT 3/（ng/mL） FT 4/（ng/mL） TSH/（mIU/L）
+
－
分别为 60.0 V（ESI ）和 70.0 V（ESI ）；离子能量电压分 对照组 0.62±0.08 8.04±1.16 1.82±0.16 18.11±1.51 1.25±0.13
模型组 0.78±0.09 a 11.29±1.67 a 5.91±0.98 a 52.29±8.44 a 0.76±0.11 a
+
－
别为35.0 V（ESI）和34.0 V（ESI ）。 甲巯咪唑组 0.70±0.08 b 8.95±1.23 c 4.32±0.84 c 35.24±6.97 c 0.92±0.12 b
2.2.3 数据分析 a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型组
将UPLC-TOF-MS分析所得数据导入Progenesis QI 比较，P＜0.01。
软件，并在每个分析步骤中可视化原始数据。采用主成 甲巯咪唑组有向对照组回调的趋势，表明甲巯咪唑可改
分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最 善甲亢大鼠机体异常代谢情况。结果见图1和图2。
小 二 乘 - 判 别 分 析（orthogonal partial least squares- 800 1 500
600 1 000 K
discriminant analysis，OPLS-DA）对数据进行分析，然后 400 500 M
X
200
以差异倍数（fold change，FC）≥2、P≤0.05 和变量重要 0 0
－200 －500
性投影（variable importance in projection，VIP）值＞1 为 －400 －1 000
－600 30
条件，筛选潜在差异代谢物 ，并采用 MetaboAnalyst 5.0 －800 20
[6]
30
软件绘制热图将数据可视化，然后结合人类代谢组学数 20 0 10 t[2]
800
据库（HMDB，http：//www.hmdb.ca/）、京都基因和基因组 t[1] 10 0 600
1 500 400
百科全书（KEGG，https：//www.kegg.jp/）等对差异代谢 1 000 0 200
500 －200
物及其相关代谢通路进行分析。 0 －400
2.3 统计学方法 －500 －600
－1 000 －800
实验数据采用SPSS 26.0软件进行分析处理。数据 A.正离子模式下
用 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两 －5 0 5 10 15
2 000 20 25 30 35 K
两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。 1 500 2 000 M
X
3 结果 1 000 1 500
3.1 药效学实验结果 500 1 000
500
3.1.1 大鼠基本情况变化 0
0
造模7 d后，模型组大鼠出现毛色黄暗而不顺、脾气 －500
－500
暴躁、便多等症状；与对照组相比，该组大鼠体重显著降 －1 000
－1 000
－1 500
低、肛温显著升高（P＜0.01），表明造模成功。甲巯咪唑
－2 000 －1 500
片干预 15 d 后，与模型组相比，甲巯咪唑组大鼠毛色柔 t[1] 0 5 10 15 20 －2 000
顺、便量减少，脾气暴躁等症状也有所缓解，体重显著升 25 30 35
B.负离子模式下
高、肛温显著降低（P＜0.01）。结果见表1。 注：K为对照组，M为模型组，X为甲巯咪唑组。
表1 各组大鼠体温和体重变化（x±s，n＝10） 图1 正负离子模式下各组大鼠尿液的PCA图
组别 肛温/℃ 体重/g 3.2.2 差异代谢物的筛选
对照组 35.57±0.45 191.48±8.86
模型组 38.46±0.41 a 157.51±7.59 a 由图 3 可知，与对照组相比，模型组大鼠尿液中有
甲巯咪唑组 37.23±0.43 b 176.03±7.24 b 22个代谢物表达显著下调，44个代谢物表达显著上调，
a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。 196个代谢物表达差异无统计学意义；与模型组相比，甲
3.1.2 大鼠血清生化指标检测结果 巯咪唑组大鼠尿液中有3个代谢物表达显著下调，23个
与对照组相比，模型组大鼠血清中T3、T4、FT3、FT4水 代谢物表达显著上调，30个代谢物表达差异无统计学意
平均显著升高，TSH 水平显著降低（P＜0.01）。与模型 义。进一步分析发现，上述3组样品取交集后，共有5个
组相比，甲巯咪唑组大鼠血清中T3、T4、FT3、FT4水平均显 差异代谢物（见表 3）。与对照组相比，模型组大鼠尿液
著降低，TSH水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结果 中 2-氧代-4-甲硫基丁酸和脱氧胞苷显著下调，癸二酸、
6
见表2。 利胆酸3-O-葡萄糖醛酸和N ，N ，N -三甲基-L-赖氨酸表
6
6
3.2 尿液代谢组学分析结果 达显著上调（P＜0.01）；与模型组相比，甲巯咪唑组大鼠
6
6
6
3.2.1 PCA、OPLS-DA结果 尿液中癸二酸、利胆酸3-O-葡萄糖醛酸和N ，N ，N -三甲
PCA 结果显示，对照组、模型组和甲巯咪唑组大鼠 基-L-赖氨酸表达均显著下调（P＜0.05或P＜0.01），2-氧
的 PCA 散点均能分开，且组内样品均能较好地聚集，说 代-4-甲硫基丁酸、脱氧胞苷表达均显著上调（P＜0.05或
明各组间代谢物有明显差异。进一步 OPLS-DA 发现， P＜0.01），结果见图4、表4。
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