Page 32 - 《中国药房》2024年8期
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类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种自            DMEM 培养基（批号 8123435）购自赛默飞世尔生物化
          身免疫性疾病，以滑膜增生、骨损伤、软骨破坏和关节腔                           学制品（北京）有限公司；CCK-8试剂（批号08137008）购
          变窄为主要临床特征，最终可导致患者关节变形甚至残                            自广州赛库生物技术有限公司；乙腈、磷酸二氢钾
          疾、死亡，严重降低了患者的生活质量                 [1―2] 。目前，药物     （KH2PO4 ）为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离
          是RA的常规治疗手段，非甾体抗炎药、糖皮质激素和生                           子水。
          物制剂常被用于 RA 的临床治疗 。尽管这些药物有明                          1.3 细胞
                                      [3]
                                             [4]
          显的治疗效果，但长期使用毒副作用较大 ，因此开发新                               小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7细胞，批
          型、高效、低毒的抗RA药物十分必要。                                  号20190513）购自上海细胞生物学研究所。
              粉防己碱（tetrandrine，TET）是从我国传统中药粉防                 2 方法与结果
          己中提取而得的活性成分，具有抗炎、抗心律失常、抗肿
                                                              2.1 FA-CS-SA/TET纳米胶束的制备
          瘤等药理作用 。相关研究发现，TET 可减轻胶原诱导
                      [5]
                                                                  称取一定量的CS-SA（本课题组前期合成，CS与SA
                      [6]
          的大鼠关节炎 。但由于TET水溶性差、生物利用度低，                                          [11]
                                                              的摩尔比为1∶6.3） ，加入水30 mL溶解，再向其中缓慢
                             [7]
          使得其临床应用受限 。因此，有必要对 TET 的溶解性
                                                              滴加过滤后的FA活性酯（本课题组前期合成，FA与CS-
          和生物利用度进行改善。壳聚糖（chitosan，CS）是一种
                                                                               [12]
                                                              SA 的摩尔比为 3∶1） ，在 45 ℃避光条件下以 400 r/min
          可生物降解的聚合物，具有良好的生物相容性，当其作
                                                              磁力搅拌48 h。反应结束后，将溶液避光透析24 h，以除
          为载体时，可增强药物的控释性、减少药物的毒副作
                                                              去未完全反应的 FA，即得 FA-CS-SA 溶液，进一步经冷
            [8]
          用 。研究发现，巨噬细胞在RA的病理进程中具有重要
                                                              冻干燥后得淡黄色的FA-CS-SA冻干粉。
          作用 ，且被炎症激活的巨噬细胞中存在叶酸（folic
              [9]
                                                                  精密称取一定量的 TET 原料药和 FA-CS-SA 冻干
                                  [10]
          acid，FA）受体过表达的现象 ，由此推测，FA对RA炎症
                                                              粉，加水适量充分混合，经探头超声（功率200 W，在冰浴
          部位的巨噬细胞具有较强的亲和力。基于此，本研究拟
                                                              条件下工作 2 s 停 3 s）一定时间后，即得 FA-CS-SA/TET
          制备 FA 修饰的粉防己碱壳聚糖-硬脂酸（FA-CS-SA/
                                                              纳米胶束溶液，进一步经冷冻干燥后得 FA-CS-SA/TET
          TET）纳米胶束，并进行表征和体外抗炎活性考察，以期
                                                              冻干粉（临用时，以水复溶成 FA-CS-SA/TET 纳米胶束
          为抗RA药物的研发提供参考。
                                                              溶液）。
          1 材料
                                                              2.2 TET定量分析方法的建立
          1.1 主要仪器
                                                                  参考文献[13]方法，对TET进行定量分析。
              本研究所用主要仪器包括 H-100 型透射电镜（日本
                                                              2.2.1 TET标准品溶液的配制
          Hitachi 公司）、Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国
                                                                  精密称取 TET 标准品 2.00 mg，置于 10 mL 棕色容
          Agilent 公司）、ZEN3690 型纳米激光粒度分析仪（英国
                                                              量瓶中，加入适量乙腈超声（功率 200 W，频率 25 kHz）
          Malvern 公司）、BX53 型正置荧光显微镜（日本 Olympus
                                                              至完全溶解，再以乙腈定容，即得质量浓度为 200.00
          公司）、CUBIS MSE125P型十万分之一天平（德国Sarto‐
          rius 公司）、D\Max-rA 型Ｘ射线衍射仪（德国 Bruker 公               μg/mL的TET标准品溶液。
          司）、DSC-60 型差示扫描量热仪（日本 Shimadzu 公司）、                 2.2.2 供试品溶液和空白纳米胶束溶液的配制
          ELX808型酶标仪（美国BioTek公司）等。                                精密称取适量 FA-CS-SA/TET 冻干粉，加水超声并
          1.2 主要药品与试剂                                         定容于10 mL容量瓶中。吸取上述FA-CS-SA/TET纳米
              TET 原料药（批号 20230412，纯度 98.9%）购自西安               胶束溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，以适量甲醇稀释，
          山川生物技术有限公司；TET标准品（批号18080302，纯                      超声（功率200 W，频率25 kHz）破乳，再以甲醇定容，即
          度 99.85%）购自成都普菲德生物技术有限公司；CS（批                       得供试品溶液。
          号180306，分子量2 000）购自济南海得贝海洋生物工程                          精密称取FA-CS-SA冻干粉2.0 mg，加水超声（功率
          有限公司；硬脂酸（stearic acid，SA；批号 20000704）购自             200 W，频率 25 kHz）并定容至 10 mL 容量瓶中，即得空
          天津市东丽区天大化学试剂厂；FA（批号 190320）购自                       白纳米胶束溶液。
          上海如吉生物科技发展有限公司；N-羟基琥珀酰亚胺                            2.2.3 色谱条件
         （NHS）、N，N′-二环己基碳二亚胺（DCC）（批号分别为                           以 Agilent ODS C18 （4.6 mm×200 mm，5 μm）为色
          MKBS3566V、STBB7253）均购自西格玛奥德里奇（上                     谱柱，以乙腈-10 mmol/L KH2PO4溶液（含 0.1%TEA）为
          海）贸易有限公司；三乙胺（TEA，批号095206）购自北京                      流动相进行等度洗脱（80∶20，V/V）；检测波长为280 nm；
          迈瑞达科技有限公司；胎牛血清（FBS，批号 8118392）、                     流速为1 mL/min；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。


          · 926 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 8                               中国药房  2024年第35卷第8期
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