Page 25 - 《中国药房》2024年7期

300
（ 个/mL ） 200 a a

侵袭细胞数/ 100 abc

0
空白组 CUR组 ZER组 CUR+ ZER组
空白组 CUR组 ZER组 CUR+ZER组
A.细胞侵袭染色显微图（结晶紫染色，×25） B.侵袭细胞数柱形图（x±s，n＝8）
a：与空白组比较，P＜0.01；b：与CUR组比较，P＜0.01；c：与ZER组比较，P＜0.01。
图5 CUR和ZER联用对细胞侵袭的影响
3.6 CUR和ZER联用对PI3K/Akt信号通路的影响 症反应、肿瘤转移等多个过程均涉及细胞迁移。由于转
与空白组比较，CUR 组、ZER 组、CUR+ZER 组细胞 移性疾病是导致癌症患者死亡的关键因素，因此了解细
中 p-PI3K、p-Akt、VEGF-A 蛋白的相对表达水平均显著 胞迁移机制对于癌症研究至关重要。考虑到NSCLC的
降低（P＜0.01）；与 CUR 组、ZER 组比较，CUR+ZER 组 主要特征之一是转移，本研究划痕实验、Transwell 迁移
细胞中 p-PI3K、p-Akt、VEGF-A 蛋白的相对表达水平均 实验、Transwell 侵袭实验结果显示，与 CUR 组、ZER 组
显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结果见图6。 比较，CUR+ZER 组细胞迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞
数显著降低，进一步证实 CUR 和 ZER 联用能够协同增
300
p-PI3K 85 kDa 强抑制细胞迁移和侵袭的能力。
p-PI3K/β-actin a PI3K/Akt 信号通路是细胞生存和发育的关键通
p-Akt 60 kDa 200 a
VEGF-A 23 kDa 100 abc [13]
β-actin 45 kDa 路 。PI3K 具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性，被激活后，
0 PI3K 的 p110 亚基通过与 p85 亚基结合将底物磷脂酰肌
空白组 CUR组 ZER组 CUR+ ZER组 空白组 CUR组 ZER组 CUR+ ZER组 醇二磷酸转化为磷脂酰肌醇三磷酸。而磷脂酰肌醇三
A.蛋白表达电泳图 B. p-PI3K的蛋白表达水平柱
形图（x±s，n＝8） 磷酸与Akt的氮端PH结构域结合，使Akt蛋白上的丝氨
[14]
300 1.0 酸 473 和苏氨酸 308 磷酸化位点激活 。Akt 作为丝氨
a 0.8
p-Akt/β-actin 200 a abc VEGF-A/β-actin 0.6 a a ade 酸/苏氨酸激酶，参与多种重要生长因子的生成和调
控 。生长因子VEGF-A是一种高度特异的促血管内皮
[15]
0.4
100
0 0.2 0 生长因子，具有促进血管通透性、调控细胞外基质变性、
空白组 CUR组 ZER组 CUR+ ZER组 空白组 CUR组 ZER组 CUR+ ZER组 调控血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等功能 。研
[16]
C. p-Akt的蛋白表达水平柱 D. VEGF-A的蛋白表达水平 究表明，PI3K/Akt 通路可上调 VEGF-A 的表达，从而促
形图（x±s，n＝8） 柱形图（x±s，n＝8）
进肿瘤细胞的生长和迁移 。为了深入探究 CUR 和
[17]
a：与空白组比较，P＜0.01；b：与CUR组比较，P＜0.01；c：与ZER组
比较，P＜0.01；d：与CUR组比较，P＜0.05；e：与ZER组比较，P＜0.05。 ZER联用对PI3K/Akt/VEGF-A通路的影响，本研究采用
图6 CUR和ZER联用对PI3K/Akt信号通路的影响 Western blot 检 测 CUR 和 ZER 联 用 对 p-PI3K、p-Akt、
VEGF-A 蛋白表达水平的影响，结果显示，与空白组比
4 讨论
较，CUR 组、ZER 组 p-PI3K、p-Akt 蛋白的相对表达水平
CUR 和 ZER 分别作为姜黄和球姜的主要有效成
均显著降低；与 CUR 组、ZER 组比较，CUR+ZER 组 p-
[8]
分，已被证实对NSCLC具有抑制作用 。本研究首先通
PI3K、p-Akt 蛋白的相对表达水平进一步降低，这表明
过 CCK-8 实验获得了 CUR、ZER 单独对 A549 细胞活力
CUR 和 ZER 联用可能通过协同抑制 PI3K 的激活、阻断
的抑制作用浓度。同时采用金氏公式计算药物联用效
p-PI3K 与 Akt 的结合，从而协同抑制 Akt 的激活，诱导
果，结果显示，CUR 8 μmol/L+ZER 6 μmol/L组合的CDI
NSCLC 细胞凋亡。同时，本实验结果显示，与 CUR 组、
最大，表明这组合的协同作用最明显。流式细胞实验和 ZER 组比较，CUR+ZER 组 VEGF-A 蛋白的相对表达水
克隆形成实验结果显示，与CUR组、ZER组比较，CUR+ 平显著降低，进一步提示 CUR 和 ZER 联用可能通过协
ZER 组细胞凋亡率显著升高、细胞克隆形成率显著降 同抑制Akt的激活、协同抑制VEGF-A的表达，从而发挥
低，表明 CUR 和 ZER 联用后协同抑制细胞增殖的效果 协同促进NSCLC细胞凋亡和抑制其迁移的作用。
明显优于二者单独使用。 综上所述，CUR 和 ZER 联用后起到协同作用，能显
细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常 著促进 NSCLC 细胞凋亡，抑制细胞增殖、迁移和侵袭，
生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动 其潜在的机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路，进而下调
[10]
形式 。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎 VEGF-A的蛋白表达密切相关。

中国药房 2024年第35卷第7期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 7 · 791 ·