Page 20 - 《中国药房》2024年6期

sham operation group. Compared with the sham operation group， GSNOR content increased significantly in the hippocampus of rats
in model group， while GSNO content decreased significantly （P＜0.05）. The active components of XBJ， such as 4-
methylenemiltirone and salviolone， could be bound to GSNOR protein， with the binding energy lower than －6 kcal/mol， mainly
connected by hydrogen bonds. Animal experiments revealed that mNSS score and GSNOR levels in the hippocampus of rats in the
model group were significantly higher than those in the sham operation group （P＜0.05）， while GSNO levels and survival rate
were significantly lower than those in the sham operation group （P＜0.05）. The above indexes of rats were improved significantly
in administration groups， the mNSS score in the XBJ group was significantly lower than that in the inhibitor group， the content
changes of GSNOR and GSNO in the inhibitor group were more obvious than those in the XBJ group， and the various indicators in
the XBJ+inhibitor group were significantly better than the XBJ group and the inhibitor group （P＜0.05）. GSNOR content was
positively correlated with the mNSS score， and GSNO content was negatively correlated with the mNSS score （P＜0.05）.
CONCLUSIONS XBJ can improve the neurological function of rats and enhance their survival rates after CA/CPR， the mechanism
of which may be associated with the down-regulation of GSNOR and the up-regulation of GSNO.
KEYWORDS Xuebijing injection； cardiac arrest； cardiopulmonary resuscitation； S-nitrosoglutathione； S-nitrosoglutathione reductase

心脏骤停（cardiac arrest，CA）是全球患者主要的死 1 材料
[1]
亡原因之一，是严重的公共卫生问题 。随着心肺复苏 1.1 主要仪器
（cardiopulmonary resuscitation，CPR）技术的不断发展和 本研究所用主要仪器包括ELX808型多功能酶标仪
进步，CA患者初期恢复自主循环的比例有所提高，但其 （美国 BioTek 公司），CDS9000 型小动物麻醉机（美国
总生存率并未得到明显改善，且大部分幸存者会出现 SurgiVet 公司），ThermoMixer C 型恒温仪（德国 Eppen‐
中、重度神经功能缺损及认知功能障碍，甚至处于植物 dorf 公司），HPMS 型动物监护仪、定制小动物手术操作
人状态，给其家庭及社会造成严重的疾病负担。虽然目 系统（美国Harvard公司），NovaSeq 6000型测序系统（美
标温度管理、体外循环支持等技术对CA/CPR 患者脑损 国Illumina公司）等。
伤有益，但临床尚缺乏效果可靠的治疗措施 [2―3] 。因此， 1.2 主要药品与试剂
挖掘 CA/CPR 后脑保护的治疗靶点和有效干预措施显 血必净注射液（批号 2303031，每支 10 mL）购自天
得尤为重要。 津红日药业股份有限公司；SPL-334.1 原料药（货号
近年来，中医药用于CA救治取得了较好的效果，其 T28837）购自上海吉凯基因医学科技股份有限公司；
[4]
中中药制剂——血必净注射液应用广泛 。该注射液由 GSNOR、GSNO ELISA 检测试剂盒（货号分别为 XEY-
红花、赤芍、川芎、丹参、当归 5 味中药组成，能改善 CA/ 35884、FT-101490E）均 购 自 上 海 梵 态 生 物 科 技 有 限
CPR后患者的器官功能，并降低其死亡率 [5―6] ，但具体机 公司。
制尚未明确。S-亚硝基谷胱甘肽（S-nitrosoglutathione， 1.3 实验动物
GSNO）是人体内含量丰富的亚硝基硫醇之一，也是重要 清洁级 SD 大鼠 160 只，雄性 81 只、雌性 79 只，体重
生物活性物质一氧化氮（NO）的供体，能阻断脑缺血/再 （200±20）g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，生产
灌注动物模型的炎症反应和继发性脑损伤；同时，GSNO 许可证号为SCXK（湘）2019-0014。本动物实验方案经广
能控制 NO 持续少量释放，对 CA/CPR 致脑损伤具有改 西中医药大学实验动物福利伦理委员会审核（批准编号
[7]
善作用 。GSNO的含量受S-亚硝基谷胱甘肽还原酶（S- DW20201011-77），符合实验动物福利伦理的相关规定。
nitrosoglutathione reductase，GSNOR）的调节。近期研究 2 方法
结果表明，抑制CA/CPR后小鼠脑内GSNOR的表达，能 2.1 模型制备
够提高其脑内GSNO含量并改善其相关症状 。学者在 大鼠禁食不禁水12 h，称重后，腹腔注射3%戊巴比
[8]
其他病种的研究中发现，血必净注射液能够增加诱导型 妥（45 mg/kg）麻醉，固定于小动物实验台上，行气管插管
一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的 并实时监测，记录其呼气末二氧化碳分压；于大鼠右侧
含量，提示该药的药理作用与其调节 NO 生物活性有 股动脉置入PE50管（深度约6 cm），行血压实时监测；以
[9]
关 。因此，本研究拟从 GSNOR/GSNO 途径出发，采用 肛 温 表 监 测 大 鼠 体 温 ，并 使 其 体 温 维 持 在（37.0±
高通量测序联合酶联免疫吸附测定（ELISA）验证该途 0.5）℃；将二导联心电仪电极刺于大鼠皮下，实时监测和
径在CA/CPR 大鼠体内的表达情况，并对血必净注射液 记录其心电活动情况。分离大鼠右侧颈外静脉，置入绝
主要活性成分与 GSNOR 进行分子对接；同时，拟以 缘导管（深度约 4 cm），按本课题组前期研究及相关文
GSNOR特异性抑制剂SPL-334.1为参照，观察血必净注 献 方法制备CA/CPR模型：测得大鼠基础状态数据后，
[10]
射液对大鼠GSNOR、GSNO 表达的影响，以期明确血必 于诱颤前先行呼吸机通气 5 min（潮气量为 6 mL/kg，吸
净注射液对 CA/CPR 大鼠神经功能及生存情况影响的 入氧浓度为21%，通气频率为100次/min）；通气结束后，
潜在机制。 于大鼠右侧颈外静脉绝缘导管中插入金属导丝，通电（2

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