Page 77 - 《中国药房》2024年5期

and the length of cellular neural processes in the RA group， the cell differentiation rate in the BC 4 μmol/L group， and the length
of cellular neural processes in the BC 2 μmol/L group all significantly increased （P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with the 0 min
group， the phosphorylation levels of Akt， ERK1/2， and p38 proteins in cells of the 5， 15， 30， 60 and 120 min groups increased to
varying degrees after treated by 4 μmol/L BC， and some differences were statistically significant （P＜0.05 or P＜0.01）. After
adding the inhibitor LY/PD， compared with the BC group， the phosphorylation level of ERK1/2 protein in the PD+BC group cells
were significantly reduced （P＜0.01）， and the cell differentiation rates in the LY group， LY+BC group， PD group， and PD+BC
group was significantly reduced （P＜0.01）. CONCLUSIONS BC promotes N2a cell differentiation mainly by increasing cell
differentiation rate and neural protrusion length. The mechanism may be related to the activation of mitogen-activated protein kinase/
ERK and PI3K/Akt signaling pathways.
KEYWORDS bisdemethoxycurcumin； neuroblastoma cell； promoting neuronal differentiation； Alzheimer’s disease； neuro-
trophic activity

随着全球人口老龄化日趋严重，阿尔茨海默病 1 材料
（Alzheimer’s disease，AD）已成为全球公共健康的主要 1.1 主要仪器
威胁，给患者家庭和社会带来巨大负担。《世界阿尔茨海 3111 型 CO2 细胞培养箱购自美国 Thermo Fisher
默病报告》指出，预计到2050年，全球AD的患病数将增 Scientifc公司；Axio Vert.A1型倒置显微镜购自德国Carl
[1]
至 1.52 亿 。AD 的病理特征包括 β 淀粉样蛋白（amy‐ Zeiss公司；PowerPac HC型电泳、转膜系统及ChemiDoc
loid β-protein，Aβ）沉积、过度磷酸化 Tau 蛋白的积累及 XRs+型自动曝光分析系统均购自美国Bio-Rad公司；RT-
[2]
神经元的丢失 。上述因素均可激活小胶质细胞而引发 2100C型酶标仪购自深圳雷杜生命科学股份有限公司。
[3]
神经炎症，最终引起神经突触功能障碍、变性和死亡 。 1.2 主要药品与试剂
目前，针对AD的获批药物有胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐、 BC 对照品（批号 F1606064，纯度＞98%）购自阿拉
卡巴拉汀、加兰他敏，以及谷氨酸拮抗剂匹马万色林，但 丁试剂（上海）有限公司；RA 对照品（阳性对照药，批号
这些药物只能减缓患者症状，不能从根本上治疗或延缓 WXBC0408V，纯度≥98%）购自美国 Sigma 公司；MEM
[4]
病程，甚至还会导致患者认知恶化或治疗无效 。虽然 培养基（批号 AG29820721）购自美国 HyClone 公司；胎
神经营养因子对神经元有维持生存和促进分化的作 牛血清（批号42A0378K）购自美国Gibco公司；杜氏磷酸
[5]
用 ，但人工合成的神经营养因子很难透过血脑屏障进 盐缓冲液（Du’s phosphate buffer solution，DPBS）（批号
入大脑发挥作用。有研究表明，许多作用于磷脂酰肌醇 22059220）购自广州硕谱生物科技有限公司；胰酶细胞
3 激 酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋 白 激 酶 B 消化液（批号 YM3428512）购自上海中乔新舟生物科技
（protein kinase B，Akt）和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen- 有限公司；二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）细胞
activated protein kinase，MEK）/细 胞 外 调 节 蛋 白 激 酶 冻存液（批号YB0506）购自安诺伦（北京）生物科技有限公
（extracellular-signal regulated kinase，ERK）信号通路的 司；蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物（批号K10151133EE8D）
天然产物可以保护神经元，并抑制小胶质细胞的活化， 购自美国 APExBIO 公司；细胞裂解液（批号 11102222-
从而在AD的防治中发挥作用 [6―7] 。因此，寻找有效治疗 1130）、兔Akt抗体（批号0034021220768）、兔磷酸化Akt
AD 且具有神经营养作用的低分子量、亲脂性天然化合 （p-Akt）抗体（批号33021210511）、兔ERK1/2抗体（批号
物以替代神经营养因子是目前研究的热点。 122822230629）、兔磷酸化 ERK1/2（p-ERK1/2）抗体（批
姜黄素是中药姜黄的主要活性成分，具有神经保护 号 121522230609）、兔 p38 MEK（简写为“p38”）抗体（批
[8]
作用，可用于治疗神经退行性疾病和神经系统疾病 。 号 090122230710）、鼠 β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号
双去甲氧基姜黄素（bisdemethoxycurcumin，BC）是姜黄 033778920125）、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗
[9]
素的天然衍生物，其稳定性和溶解度均优于姜黄素 。 兔 、山 羊 抗 鼠 IgG 二 抗（批 号 分 别 为 030623230711、
BC能减少炎症反应、增强记忆力、改善氧化应激和认知 030522230675）、ERK1/2抑制剂PD98059（简写为“PD”）
功能，具有较好的神经保护作用，可用于相关神经系统 对照品（批号036057789123，纯度＞98%）、PI3K/Akt抑制
[10]
性疾病的治疗 。研究指出，BC 对 Aβ1-42诱导的人脑神 剂LY294002（简写为“LY”）对照品（批号062922220901，
经母瘤细胞SK-N-SH损伤有保护作用，可改善小鼠认知 纯 度 ＞98%）、极 超 敏 ECL 化 学 发 光 试 剂 盒（批 号
[11]
功能，并通过抑制氧化应激来发挥神经保护作用 。本 042921211206）、MTT 试剂（批号 062320200715）均购
研究以视黄酸（retinoic acid，RA）为阳性对照药，以小鼠 自上海碧云天生物技术股份有限公司；兔磷酸化 p38
脑神经母瘤细胞Neuro-2a（N2a）为细胞模型，研究BC对 （p-p38）抗体（批号 13）购自美国 CST 公司；BCA 蛋白分
N2a细胞的促神经分化作用及可能机制，为将其开发为 析 试 剂 盒（批 号 SF249044）购 自 美 国 Thermo Fisher
AD治疗相关药物提供实验依据。 Scientifc公司。

中国药房 2024年第35卷第5期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 5 · 579 ·