Page 79 - 《中国药房》2024年5期
P. 79
BC 6 μmol/L组细胞存活率虽然和对照组比较没有显著 表1 BC 诱导分化不同时间后的 N2a 细胞分化率及神
性差异，但和BC 8 μmol/L组的细胞存活率非常接近，所 经突起长度比较（x±s，n＝3）
以本研究最终确定设置 BC 浓度为 1、2、4 μmol/L，用于 48 h 72 h
组别
诱导N2a细胞分化。结果见图1。 细胞分化率/% 神经突起长度/μm 细胞分化率/% 神经突起长度/μm
对照组 3.703±0.576 91.153±9.128 6.594±1.085 113.414±5.392
150 RA组 6.346±0.882 a 117.513±7.283 13.231±1.929 a 169.812±5.619 b
BC 1 μmol/L组 7.537±1.225 b 111.912±13.388 10.528±1.607 136.008±6.496
125
BC 2 μmol/L组 11.383±0.399 b b 120.278±8.509 b 13.158±2.240 a 150.649±6.816 a
9.942±0.640
11.028±1.787
148.402±24.949
BC 4 μmol/L组
143.911±15.951
100
细胞存活率/% 75 a b 3.3 BC 对 N2a 细胞中 Akt、ERK1/2 和 p38 蛋白磷酸化
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。
50
的影响
25
与 0 min 组比较，加入含 BC 4 μmol/L 的分化培养
0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 液后，5、15、30、60、120 min 组细胞中 Akt、ERK1/2、p38
Ⅰ：对照组；Ⅱ：BC 1 μmol/L组；Ⅲ：BC 2 μmol/L组；Ⅳ：BC 4 蛋白的磷酸化水平均有不同程度升高，部分差异有统
μmol/L组；Ⅴ：BC 6 μmol/L组；Ⅵ：BC 8 μmol/L组；Ⅶ：BC 10 μmol/L 计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01）。同时，结果显示，激活
组；a：与对照组比较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。
图1 不同浓度BC对N2a细胞存活率的影响（x±s，n＝4） PI3K/Akt信号通路的最佳药物作用时间是30 min，激活
MEK/ERK信号通路的最佳药物作用时间为60 min。因
3.2 BC对N2a细胞神经分化的影响
此，后续实验采用抑制剂LY、PD干预BC作用的时间分
与对照组比较，BC 1、2、4 μmol/L 组细胞神经突起
别为30、60 min。结果见图3、图4。
长度有不同程度增加，细胞形态变为梭形。通过对 BC
3.4 不同抑制剂对 BC 激活信号通路中关键蛋白磷酸
诱导不同时间（48、72 h）细胞分化结果进行统计分析，结
化的影响
果显示，随着BC浓度的增加，整体上细胞分化率和神经
加入抑制剂LY后，与对照组比较，BC组细胞中Akt
突起长度呈剂量依赖性趋势增加。分化48 h后，与对照
组比较，RA组和BC 1、2、4 μmol/L组细胞分化率均显著 蛋白的磷酸化水平显著升高（P＜0.05），LY 组细胞中
Akt 蛋白的磷酸化水平显著降低（P＜0.01）。加入抑制
升高（P＜0.05 或 P＜0.01），BC 4 μmol/L 组细胞神经突
起长度显著增加（P＜0.01）；BC 继续诱导分化至 72 h 剂PD后，与对照组比较，PD组细胞中ERK1/2蛋白的磷
后，与对照组比较，RA组细胞分化率和神经突起长度显 酸化水平显著降低（P＜0.01）；与 BC 组比较，PD+BC 组
著升高/增加（P＜0.05 或 P＜0.01），BC 4 μmol/L 组细胞 细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化水平显著降低（P＜0.01）。
分化率和 BC 2 μmol/L 组细胞神经突起长度均显著升 结果见图5、图6。
高/增加（P＜0.05）。BC诱导48 h的细胞分化作用明显， 3.5 不同抑制剂对BC促神经分化作用的影响
诱导 72 h 后细胞分化率和神经突起长度较正常组未诱 与对照组比较，BC 组细胞分化率显著升高（P＜
导分化的细胞均有一定程度的升高/增加，但大部分差异 0.01）；与BC组比较，LY组、LY+BC组、PD组、PD+BC组
无统计学意义；且考虑到作用时间太长，拍照时发现部 细胞分化率均显著降低（P＜0.01）。各给药组与对照组
分细胞已死亡，因此后续实验确定BC作用时间为48 h。 间，神经突起长度差异均无统计学意义（P＞0.05）。结
结果见图2、表1。 果见图7、图8。
48 h
72 h
对照组 RA组 BC 1 μmol/L组 BC 2 μmol/L组 BC 4 μmol/L组
图2 BC诱导分化不同时间后N2a细胞的形态显微图
中国药房 2024年第35卷第5期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 5 · 581 ·
