Page 62 - 《中国药房》2024年3期
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KEYWORDS     Huangqin  decoction；  Trichophyton  mentagrophytes；  antifungal  activity；  mechanism  of  action；  cell  membrane；
          mitochondria



              皮肤癣菌病是皮肤癣菌侵犯人和动物的皮肤、毛                           奥博星生物技术有限责任公司；麦角固醇（纯度＞98%，
          发、甲板等所引起的一类疾病，根据发病部位可以分为                            批号 HR20525B1）购自宝鸡辰光生物科技有限公司；氯
          头癣、体癣、手癣、甲癣等。头癣表现多样，严重者可造                           霉素、特比萘芬（terbinafine，TBF）、咪康唑（miconazole，
          成永久性脱发。甲癣可表现为指甲肥厚、变色、浑浊等，                           MCZ）、两性霉素 B （amphotericin B，AMB）、卡泊芬净
          其他皮肤癣菌病多表现为瘙痒性皮疹。世界上有                              （caspofungin，CAS）（纯 度 均 大 于 98%，批 号 分 别 为
          20%～25%的人受到其影响，特别是老年人、糖尿病患者                         829J047、713T011、623M012、715V036、420O021）均 购
                      [1]
          或免疫缺陷者 。近年来，因真菌耐药性不断增强，皮肤                           自北京索莱宝科技有限公司；RPMI-1640 培养基（批号
          癣菌病的发病率也在逐年上升。目前用于治疗该病的                             2496521）购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；角鲨烯
          药物种类有限，主要为传统的抗真菌药物，包括唑类、三                           环氧酶（squalene epoxidase，SE）、羊毛甾醇 14α-去甲基
                          [2]
          唑类、烯丙胺类等 。然而，这些药物由于治疗时间长、                           化 酶（CYP51）试 剂 盒（批 号 分 别 为 YX-190500、YX-
                                                   [3]
          副作用大且耐药性强，其临床应用受到一定限制 。                             032516）均购自上海优选生物科技有限公司；苹果酸脱
              中药具有疗效好、来源广泛、不良反应少、耐药性弱                         氢酶（malate dehydrogenase，MDH）、琥珀酸脱氢酶（suc‐
          等优势，为研发天然抗真菌药物提供了宝贵资源。黄芩                            cinate dehydrogenase，SDH）和钠钾ATP酶、钙镁ATP酶、
          汤（Huangqin decoction，HQD）首载于张仲景的《伤寒                 总 ATP 酶 试 剂 盒（批 号 分 别 为 A021-2-1、A022-1-1、
          论》，由黄芩、白芍、炙甘草、大枣组成，具有清热止痢、和                         A070-6-1）均购自南京建成生物工程研究所。
                       [4]
          中止痛的作用 。现代药理研究表明，HQD 具有抗菌、                          1.3 菌株
          抗炎、解热、镇痛、解痉等作用            [5―6] 。本课题组前期研究               须癣毛癣菌临床分离株由国家卫生健康委员会真
          发现，HQD对临床分离的常见皮肤癣菌具有抑制作用，                           菌病监测网江西分中心暨江西省人民医院临床医学研
          其最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）       究所分离鉴定并保存。
          为 1.75～5.90 mg/mL ，但具体作用机制尚不明确。基                    2 方法与结果
                            [7]
          于此，本研究以须癣毛癣菌为模型菌株，考察HQD对该                           2.1 HQD的制备
          菌的菌丝生长、孢子萌发和生物量等的影响，并探讨其                                按照文献[8]方法制备 HQD：取黄芩、白芍、炙甘草
          作用机制，为HQD治疗皮肤癣菌病提供理论基础。                             和大枣按照3∶2∶2∶2的比例称取适量，加10倍量（mL/g，
          1 材料                                                下同）水，煎煮 1 h，趁热过滤；药渣加 8 倍量水继续煎煮
          1.1 主要仪器                                            1 h，过滤药液；合并 2 次药液，浓缩成每毫升含 1 g 生药
              本研究所用主要仪器有XS105DU型十万分之一天                        的药液，经冷冻干燥后保存备用。
          平（瑞士 Mettler Toledo 公司）、Multiskan FC 型酶标仪           2.2 HQD的抗菌活性评价
         （美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、LC-2010A 型高效        2.2.1 MIC和最小杀菌浓度的测定
          液相色谱仪（日本Shimadzu公司）、SPX-25085H-Ⅱ型生                      参照美国临床和实验室标准协会的《丝状真菌肉汤
          化培养箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）、HC-2517                        稀释抗真菌药敏试验的参考方法》（M38-3rd）配制须癣
                                                                                       4
          型高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、NP80                         毛癣菌终浓度为（1～5）×10  cfu/mL 的菌悬液，备用。
          型紫外分光光度计（德国Implen公司）、JEM1200型透射                     取96孔板，每孔均加入100 μL RPMI 1640培养基，然后
          电子显微镜（日本JEOL公司）。                                    向第 1 孔中加入 200 mg/mL HQD 100 μL，用移液枪混
          1.2 主要药品与试剂                                         匀后吸取100 μL至第2孔，如法依次进行2倍稀释至第
              黄芩、白芍、炙甘草、大枣饮片购自江西彭氏国药堂                         10 孔 ，使 各 孔 中 HQD 的 终 浓 度 分 别 为 100、50、25、
          饮片有限公司，经江西省人民医院药学部胡建新主任药                            12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.20 mg/mL。向第1～
          师鉴定，分别为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis              10、12孔中加入配制好的菌悬液100 μL，以第11孔为阴
          Georgi. 的干燥根、毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora             性对照，第12孔为阳性对照。AMB（0.031 25～16 µg/mL）、
          Pall. 的 干 燥 根 、豆 科 植 物 甘 草 Glycyrrhiza  uralensis   TBF（0.003 9～2 µg/mL）、MCZ（0.39～200 µg/mL）、CAS
          Fisch. 的 干 燥 根 和 根 茎 以 及 鼠 李 科 植 物 枣 Ziziphus         （0.39～200 µg/mL）为阳性对照药物。将上述96孔板置
          jujuba Mill. 的干燥成熟果实。葡萄糖、吐温-20、山梨醇                  于生化培养箱中，以28 ℃培养4 d，肉眼观察各孔真菌的
          购自上海生工生物工程股份有限公司；蛋白胨购自北京                            生长情况，并与阳性、阴性对照孔比较，以肉眼观察到无


          · 312 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3                               中国药房  2024年第35卷第3期
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