Page 64 - 《中国药房》2024年3期
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2.3 HQD的抗菌机制                                        剂 量 组 ，HQD 中 、高 剂 量 组 的 部 分 指 标 活 性 更 低
          2.3.1 HQD对须癣毛癣菌细胞壁的影响                              （P＜0.05）。
              同“2.2.1”项下方法测定在有/无 0.8 mol/L 山梨醇                表3 各组须癣毛癣菌线粒体中 MDH、SDH 及 ATP 酶
          时，HQD的MIC值（以CAS为阳性对照药）。结果显示，                             活性的检测结果（x±s，n＝3）
          在无山梨醇的条件下，CAS的MIC为50 μg/mL，而在加                      组别         MDH     SDH   钠钾ATP酶  钙镁ATP酶  总ATP酶
                                                              阴性对照组     4.56±1.23  17.46±2.17  3.08±0.17  5.33±0.42  11.67±1.23
          入 0.8 mol/L 山梨醇的条件下，CAS 的 MIC 从 50 μg/mL            TBF组      2.52±0.44 a  10.33±0.64 ab  1.68±0.28 a  3.24±0.37 ab  7.99±1.94 a
          提高至200 μg/mL，表明CAS抗须癣毛癣菌的机制与细                       HQD低剂量组   3.59±0.72  13.88±1.28 a  2.22±0.72  4.46±0.19  6.39±1.10
          胞壁有关。而 HQD 无论是否有山梨醇存在，其 MIC 值                       HQD中剂量组   2.57±1.57 a  10.61±2.11 ab  1.63±0.72 a  2.98±0.90 ab  8.60±1.69 a
                                                              HQD高剂量组   1.66±0.57 ab  9.38±2.04 abc  1.13±0.19 ab  2.24±0.97 abc  6.39±1.10 ab
          均为 3.13 mg/mL，表明 HQD 可能对须癣毛癣菌细胞壁
                                                                 a：与阴性对照组比较，P＜0.05；b：与HQD低剂量组比较，P＜
          无作用。                                                0.05；c：与HQD中剂量组比较，P＜0.05。
          2.3.2 HQD对须癣毛癣菌细胞膜的影响                               3 讨论
              同“2.2.5”项下方法培养、分组、给药、收集湿菌丝                          须癣毛癣菌可导致人体和动物各个部位感染，已成
          体。称取湿菌丝体约 0.2 g，加入 5 mL 新鲜配制的 25%                   为第二大常见的皮肤癣菌，但现有治疗药物有限，且副
          氢氧化钾乙醇溶液（25 g KOH 和 30 mL 无菌蒸馏水用                    作用大，因此从传统中药中寻找高效、低毒、低耐药的天
          100%乙醇稀释至100 mL），涡旋混合5 min，然后参考文                    然抗真菌药物具有重要意义。本研究发现，HQD对须癣
          献[11―12]方法测定须癣毛癣菌细胞膜中麦角固醇的含                         毛癣菌的MIC和MFC值分别为3.13、25 mg/mL，且可显
          量。另外，同“2.2.5”项下方法培养、分组（另设置 MCZ                      著抑制须癣毛癣菌菌丝生长、孢子萌发和生物量的产
          组作为检测CYP51活性的阳性对照）、给药、收集湿菌丝                         生，表明 HQD 可能是一种具有临床应用前景的抗真菌
          体，然后按相应试剂盒方法操作，检测须癣毛癣菌细胞                            药物。
          膜中SE和CYP51的活性。实验重复3次。由表2可知，                             细胞壁可以保护细胞形态免受外部渗透冲击，在没
          与阴性对照组相比，TBF 组和 HQD 各剂量组须癣毛癣                        有渗透稳定剂（山梨醇）的情况下，药物可破坏细胞壁的
          菌细胞膜中麦角固醇的含量均显著降低（P＜0.05），且                         完整性导致真菌细胞溶解，甚至死亡                [13―14] 。因此，山梨
          HQD的抑制作用呈剂量依赖性；TBF组和HQD中、高剂                         醇保护试验可用于探索 HQD 对真菌细胞壁是否有影
          量组须癣毛癣菌细胞膜中 SE 活性以及 MCZ 组和 HQD                      响，若有影响，在含有山梨醇培养基中，HQD 的 MIC 值
          中、高剂量组须癣毛癣菌细胞膜中CYP51活性均显著降                          将增大。而本研究中加入 0.8 mol/L 山梨醇后，HQD 的
          低（P＜0.05），且MCZ组和HQD高剂量组须癣毛癣菌细                       MIC 值无变化，表明 HQD 对须癣毛癣菌的细胞壁无作
          胞膜中CYP51活性显著低于HQD低剂量组（P＜0.01）。                      用。细胞膜是一种动态结构，由嵌入了酶和转运蛋白的
          表2 各组须癣毛癣菌中麦角固醇含量和SE、CYP51活                         脂质双分子层组成；麦角固醇是细胞膜的主要甾醇成
               性的检测结果（x±s，n＝3）                                分，不仅可参与调节细胞膜的通透性和流动性，还可维
                                                                                  [15]
           组别        麦角固醇含量/（μg/g）   SE活性       CYP51活性       持细胞膜结构的完整性 。SE 是一种黄素腺嘌呤二核
           阴性对照组       419.04±16.98  629.29±55.77  319.54±41.21  苷酸，其可催化角鲨烯环氧化为 2，3-氧化角鲨烯，从而
           TBF组        296.16±14.51 ab  424.15±52.24 a  －
           MCZ组          －            －         204.38±23.64 ab  导致麦角固醇生物合成途径的级联反应；CYP51的阻断
           HQD低剂量组     366.18±11.82 a  522.37±41.91  274.22±23.34  可导致羊毛甾醇和其他 14α-甲基化甾醇在真菌细胞膜
           HQD中剂量组     305.67±22.70 ab  426.75±92.06 a  241.38±27.27 a  中积累，从而导致膜通透性变化和膜蛋白功能障碍           [12，16] 。
           HQD高剂量组     193.56±24.80 abc  375.47±56.83 a  216.41±37.38 ab
             a：与阴性对照组比较，P＜0.05；b：与HQD低剂量组比较，P＜                线粒体是ATP合成的主要细胞器，是细胞进行有氧呼吸
          0.01；c：与HQD中剂量组比较，P＜0.01；－：无相应数据。                   的主要场所，其脱氢酶（包括 MDH 和 SDH）是 ATP 生物
          2.3.3 HQD 对须癣毛癣菌线粒体中 MDH、SDH 及 ATP                  合成中非常重要的酶 。基于此，笔者在抗真菌机制研
                                                                                [17]
          酶活性的影响                                              究中，选择不同的药物作为阳性对照：（1）TBF能降低生
              同“2.2.5”项下方法培养、分组、给药、收集湿菌丝                      物膜中麦角固醇含量，还能通过抑制 SE 活性来抑制真
                                                                                                         [18]
          体，提取线粒体，然后参考相应试剂盒说明书方法操作，                           菌细胞膜中麦角固醇的合成并影响线粒体酶活性 ，因
          检测线粒体中 MDH、SDH 及 ATP 酶（钠钾 ATP 酶、钙镁                  此，在麦角固醇含量测定、SE和MDH、SDH以及ATP酶
          ATP 酶和总 ATP 酶）的活性。实验重复 3 次。由表 3 可                   活性检测实验中，笔者选择TBF作为阳性对照药物。（2）
          知，与阴性对照组比较，TBF 组和 HQD 中、高剂量组须                       MCZ 作为 CYP51 的抑制剂，可以与细胞色素 P450 的血
          癣毛癣菌线粒体中 MDH、SDH、钠钾 ATP 酶、钙镁 ATP                    红素铁原子结合，阻止羊毛甾醇 14α-甲基的氧化去
                                                                [19]
          酶、总ATP酶活性均显著降低（P＜0.05）；且相比HQD低                      除 ，因此，在 CYP51 活性测定实验中，笔者选择 MCZ

          · 314 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3                               中国药房  2024年第35卷第3期
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