Page 63 - 《中国药房》2024年3期

真菌生长的最低药物质量浓度为 MIC 值。结果显示， 比，TBF 组和 HQD 各剂量组须癣毛癣菌孢子萌发率均
HQD、AMB、TBF、MCZ、CAS 的 MIC 值 分 别 为 3.13 显著降低（P＜0.05），且HQD的抑制作用呈剂量依赖性。
mg/mL、1 μg/mL、0.062 5 μg/mL、6.25 μg/mL、50 μg/mL。 2.2.4 HQD对须癣毛癣菌生物量的影响
上述药敏实验结束后，吸取HQD各给药组的内容物200 实验分为阴性对照组、TBF 组（0.062 5 μg/mL）和
µL 至沙氏葡萄糖琼脂培养基（Sabouraud dextrose agar， HQD 低、中、高剂量组（1.56、3.13、6.25 mg/mL）。取无
SDA）培养板上培养7 d，以不长菌落的最低药物质量浓 菌摇菌管，加入 5 mL 含药沙氏葡萄糖液体培养基
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度为最小杀菌浓度（minimal fungicidal concentration， （Sabouraud dextrose broth，SDB）和 1 mL 含有 5.0×10
MFC）。结果显示，HQD的MFC值为25 mg/mL。 cfu/mL 的须癣毛癣菌菌悬液，用封口膜密封摇菌管，在
2.2.2 HQD对须癣毛癣菌菌丝生长的影响 28 ℃条件下以 120 r/min 振荡 6 d；过滤收集菌丝体，烘
参照文献[9]方法测定HQD对须癣毛癣菌菌丝生长 干，称重，将其作为须癣毛癣菌的生物量。实验重复 3

的影响。实验分为阴性对照组、TBF组（0.062 5 μg/mL， 次。由表 1 可知，与阴性对照组比较，TBF 组和 HQD 各
剂量组须癣毛癣菌生物量均显著降低（P＜0.05），且
剂量根据“2.2.1”项下结果设置）和 HQD 低、中、高剂量
HQD 高 剂 量 组 的 生 物 量 显 著 低 于 HQD 低 剂 量 组
组（1.56、3.13、6.25 mg/mL，剂量根据“2.2.1”项下结果设
（P＜0.05）。
置）。将须癣毛癣菌接种在 SDA 培养板上，培养一段时
2.2.5 HQD对须癣毛癣菌菌丝超微结构的影响
间后，用直径为 9 mm 的打孔器取菌块作为菌饼备用。
实验分为阴性对照组、TBF 组（0.062 5 μg/mL）和
取不同质量浓度的HQD与预热的SDA培养基混合均匀
HQD 低、中、高剂量组（1.56、3.13、6.25 mg/mL）。首先，
后倒入直径为9 cm的无菌培养皿中制备含药培养基，在
3
将浓度为5×10 cfu/mL的须癣毛癣菌菌悬液在28 ℃下
此培养皿中用9 mm的打孔器除去中间培养基并接种上
培养3 d，然后加入相应药液，继续培养5 d；过滤菌丝并
述 9 mm 的菌饼，用封口膜密封培养皿，置于 28 ℃培养
用无菌蒸馏水洗涤后，置于2.5%戊二醛中固定过夜；取
箱中培养 6 d，采用十字交叉法测量菌丝长度。菌丝长
出固定后的菌丝，用磷酸盐缓冲液漂洗、锇酸固定、磷酸
度（mm）＝菌丝长度测量平均值－9。实验重复3次。采
盐缓冲液再漂洗、乙醇梯度脱水后，依次用丙酮和树脂
用 SPSS 21.0 软件对数据进行统计分析，数据以 x±s 表
混合液（1∶0、3∶1、1∶1、1∶3）处理，纯树脂包埋，切薄片，
示，多组间比较采用单因素方差分析，检验水准α＝0.05
经醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色后使用透射电镜观察。
（下同）。由表 1 可知，与阴性对照组相比，TBF 组和
由图1（HQD低剂量组图略）可知，阴性对照组须癣毛癣
HQD 各剂量组须癣毛癣菌菌丝长度均显著缩短（P＜
菌菌丝显示出清晰和完整的细胞结构，具有典型的细胞
0.05），且 TBF 组和 HQD 高剂量组须癣毛癣菌菌丝长度
核和线粒体等；与阴性对照组相比，各给药组菌丝的细胞
显著短于HQD低剂量组（P＜0.05）。
结构均受到了一定程度的破坏，HQD低剂量组菌丝部分
表1 各组须癣毛癣菌菌丝长度、孢子萌发率、生物量的
线粒体内容物被破坏；TBF组和HQD中剂量组细胞核被
检测结果（x±s，n＝3）
破坏，线粒体肿胀，细胞内容物渗漏；HQD高剂量组菌丝
组别 菌丝长度/mm 孢子萌发率/% 生物量/mg
阴性对照组 15.25±1.00 89.33±8.08 21.55±3.80 高度空泡化，线粒体严重肿胀，细胞内容物流失严重。
TBF组 12.29±0.38 ab 30.00±6.00 ab 10.95±3.21 a
HQD低剂量组 13.67±0.44 a 44.00±6.00 a 15.88±1.94 a
HQD中剂量组 12.63±0.78 a 26.00±6.00 ab 13.33±3.28 a
HQD高剂量组 11.33±0.80 ab 18.67±7.02 abc 10.43±1.91 ab
a：与阴性对照组比较，P＜0.05；b：与HQD低剂量组比较，P＜
0.05；c：与HQD中剂量组比较，P＜0.05。
2.2.3 HQD对须癣毛癣菌孢子萌发的影响 100 nm 500 nm
实验分为阴性对照组、TBF 组（0.062 5 μg/mL）和 A.阴性对照组 B. TBF组
HQD 低、中、高剂量组（1.56、3.13、6.25 mg/mL），将相应
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药液与须癣毛癣菌菌悬液（5.0×10 cfu/mL）充分振荡混
合均匀后，接种于含有SDA的凹玻片上，置于湿盒中，于
28 ℃培养24 h。采用显微镜观察孢子萌发情况（以抽出
芽管、长出菌丝为萌发），计算每100个孢子中萌发的孢
500 nm 1 μm
子 数 ，孢 子 萌 发 率 ＝ 发 芽 孢 子 数/检 查 孢 子 总 数 × C. HQD中剂量组 D. HQD高剂量组
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100% 。实验重复 3 次。由表 1 可知，与阴性对照组相 图1 各组须癣毛癣菌菌丝的透射电镜图

中国药房 2024年第35卷第3期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 3 · 313 ·